第一章实验室及基本操作2014详解.ppt

一、组织培养实验室布局的总体要求 便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察 二、构成 化学实验室（洗涤室） 接种室 无菌培养室 灭菌室 细胞学观测室（可以不设） 2. 培养室 满足材料的生长（光、热、水、气）。 要求： 保温隔热； 控温、控光； 暗室。 设备：培养架、 加温设备、降温设备 3. 化学实验室 器皿的洗涤、干燥、保存； 药品称量、溶解、培养基的配置； 植物材料预处理，培养材料的观察分析。 主要设备 工作台、药品柜、冰箱、烘箱、天平、蒸馏水器。 6. 双筒实体显微镜（解剖镜） 茎尖的剥取（分生组织）； 对植物材料的隔瓶观测。 7. 蒸馏水器 减小实验中的偶然因素。 8. 空调 温度变化差异不大。 9. 震荡培养机和旋转培养机 液体培养。 10. 培养箱 1. 玻璃器皿 ①培养器皿 原则：无毒透光； 试管：2×15，2.5×15，3×15。 三角瓶：50ml，100ml，150ml，200ml。（主要用于继代培养） 培养皿：原生质体、游离细胞、花药等的培养； 无菌种子的萌发； 材料的分离； 无菌滤纸的消毒灭菌 封闭物防止培养基干燥和杜绝污染、无毒透气（棉塞、菌膜） ②盛装器皿 烧杯、试剂瓶， 药品的溶解和储存。 ③计量器皿 量筒： 10ml、25ml、50ml、100ml、200ml、500ml、1000ml。 容量瓶：25ml，50ml，100ml，250ml，500ml，1000ml。 移液管：0.1ml，0.2ml，1ml，2ml，5ml，10ml。 ④其他 漏斗 玻棒 滴瓶 大量元素； 微量元素； 维生素、氨基酸等（有机附加物）。 糖类：蔗糖、葡萄糖等。 凝固剂：琼脂等。 激素 生长素类：IAA、IBA、NAA、2，4-D。 细胞分裂素类：6-BA、KT、ZT 赤霉素类：GA3 5. 培养材料的支持物 琼脂 固体培养时琼脂是最好的固化剂。 琼脂的用量在0.8-1.0%之间 。 凝固能力除与原料、厂家的加工方式有关外， 还与高压灭菌时的温度、时间和pH值等因素有关。 其它：玻璃纤维、滤纸桥、海绵、卡拉胶等。 2）选择原则 同一物种的不同亚种、品种间的基本培养基类型基本相同； 同一植物的不同组织、器官的基本培养基类型基本相同； 营养成分需求与田间栽培有相似性； 无机盐浓度是基本培养基类型的重要因素， 应该作为培养基选择的重要参数； 有机成分主要是种类的变化，每种成分含量的变化不大； 在确定基本培养基类型后，研究最适的蔗糖浓度。 2. 母液配制 1）优点 减少工作量; 减少多次称量造成的误差; 便于微量元素的称量; 保证每一个材料的培养基有相同的成分。 3）母液配制注意事项 植物生长调节剂的溶解 生长素类：碱溶； 95%乙醇溶、蒸馏水定容。 细胞分裂素类：酸溶、蒸馏水定容。 赤霉酸：热水溶，以95%乙醇配成原液。 （二）常用的灭菌方法 灭菌 用物理或化学的方法， 杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体， 即把所有生命的物质全部杀死。 消毒 杀死、消除或充分抑制部分微生物， 使之不再发生危害作用。 6. 无菌操作 在无菌操作前30min先使超净工作台处于工作状态，同时开启紫外灯。 关掉紫外灯10min后即可进入接种室； 进入接种室前用肥皂洗净双手， 穿戴好工作衣帽后进入接种室， 用70％酒精擦拭双手和台面。 操作期间也应再擦拭数次。 将材料放入广口瓶（灭菌小烧杯）进行消毒。 消毒完毕，将材料放置于无菌培养皿中， 用灼烧过的器械切取适当的外植体。 外植体植入培养基。 污染外植体的挽救措施 再次使用消毒剂处理；