高效液相色谱法分析.pptVIP

高效液相色谱 一、概述 generalization 1. 高效液相色谱法与经典液相（柱）色谱法比较 2. 高效液相色谱法与气相色谱法比较 HPLC与GC有许多相似之处，GC具有分析速度快，样品用量少，灵敏度高，选择性好和分离效率高等特点。但它仅适于分析蒸气压低，沸点低的样品，而不适用于分析高沸点有机物，高分子和热稳定性差的化合物。而HPLC可弥补其不足，在全部有机化合物中20﹪可用GC，80﹪可用HPLC分析。 3. HPLC的特点 ⑴. 分离效能高 实用新型高效微粒固定相，柱效达n=2×103~5×104块／m ⑵. 选择性高 流动相种类多，可选择不同流动相和不同比例的混合流动 相，梯度洗脱等提高选择性 ⑶. 检测灵敏度高 匹配高灵敏度的检测器，如UVD,FD等 ⑷. 分析速度快 流动相用高压泵输送，完成一个样品的分析时间仅需几分钟 到几十分钟。 4. HPLC法的应用范围和局限性 方法的局限性 a）.HPLC中，多种溶剂做流动性，分析成本高于GC，易引起环境污染。当进行梯度洗脱时，比气相程序升温复杂。 b）.HPLC中缺少GC中使用的通用性检测器如：FID,TCD等。RID属于通用性检测器，但不能用于梯度洗脱，灵敏度较低。 c）.不能替代GC分析组成复杂的具有多沸程的石油产品，用毛细管GC分析。 d）.HPLC也不能代替中低压柱色谱法，在200KPa至1MPa柱压下去分析受压易分解，变性的具有生物活性的生化产品。 二．液相色谱速率理论 色谱基本理论有塔板理论和速率理论，塔板理论在 HPLC和GC的意义完全相同，速率理论由于HPLC和GC 流动相状态（气体和液体）不同而有所差别 : 液体的扩散系数比气体要小105倍左右， 液体粘度比气体约大102倍， 液体表面张力比气体约大104倍， 液体密度比气体约大103倍， 液体是不可压缩的。 HPLC的速率理论方程式和GC的速率方程的主要差别表现在 纵向扩散项和传质阻抗项上。 1. 液相色谱速率方程式 1958年Giddings等人在Van Deemter方程的基础上提出液相色 谱速率方程式，其表现形式为： H=A+B/u+Cmu+ Csmu+ Csu； 与Van Deemter方程相比，多了静态传质阻抗项Csmu ，A、 B、Cm及Cs虽然与Van Deemter方程相同，但含义有所不同。 纵向扩散项 B=2γDm。Dm—被分离组分分子在流动相中的扩 散系数。 在液相色谱中流动相为液体，粘度（η）比载气大得多，而且 柱温多采用室温，一般比GC的柱温低得多。而Dm∝T/η，因此 HPLC的Dm比GC的Dm约小105倍。其次为了节约时间，一般采用 的流动相流速至少是最佳流速度的3~10倍，这些因素都促使B/u项 减小，可以忽略不计。 在HPLC中 H=A+Cmu+ Csmu+ Csu  若将各项的函数代入上式， 则 H=2λdp+(Cm′dp2/Dm )u+(Csm′dp2/Dm)u+(Cs′df2/Ds)u 上式中的dp、df、Dm及Ds与Van Deemter方程中的相应函数的含义相同。由此方程得出如下结论： ⑴.流动相流速与板高的关系 : 若将上式中三个传质阻抗系数（Cm Cs Csm）合并为C 则 H=A+Cu 有上式看出，在HPLC中，可以近似的认为H∝u呈直线关系，A为截距，C为斜率，流速增大，板高增加，柱效降低。为了兼顾柱效及分析速度，一般采用较低流速，如常用1ml/min。 流动相流速对GC和HPLC板高的影响对比见下图 GC和HPLC中流动相最佳流速。HPLC比GC小，但随着u的 增加，对HPLC板高的影响没有对GC板高的影响那么显著，所 以为了加快分析时间，HPLC的流动相流速一般比最佳流速大 3~5倍。 ⑵.涡流扩散项: A=2λdp; λ—填充不规则因子，dp为填料（固定相）颗粒直径 色谱柱填充越不均匀，λ越大，为了使A减小，提高柱效，可从两方面采取措施: a).降低dp，采用小粒度，仄粒度的固定相，用3~5μm的填料，柱效可达8~10万片/米 b).降低λ，采用球形，仄粒度分布（RSD5%）的固定相和匀浆装柱法。用球形填料有助于提高柱的渗透性，降低柱压并易于装填均匀。 ⑶.传质阻抗项（系数）