第十章甾体激素类药物详解.ppt

第十章 甾体激素类药物分析 第一节 基本结构与分类 结构特点(续) ?分 类 一、肾上腺皮质激素 肾上腺皮质激素（续） 肾上腺皮质激素（续） 肾上腺皮质激素（续） 肾上腺皮质激素（续） 肾上腺皮质激素（续） 肾上腺皮质激素（续） 肾上腺皮质激素（续） 肾上腺皮质激素（续） 二、雄性激素及蛋白同化激素 雄性激素及蛋白同化激素(续) 雄性激素及蛋白同化激素(续) 雄性激素及蛋白同化激素(续) 三、孕激素 孕激素(续) 四、雌激素 雌激素(续) 雌激素(续) 雌激素(续) 第二节 鉴别试验 一、化学鉴别法 与强酸的呈色反应(续) 与强酸的呈色反应(续) 与强酸的呈色反应(续) （二）官能团的反应 官能团的呈色反应(续) 官能团的呈色反应(续) 官能团的呈色反应(续) 官能团的呈色反应(续) 官能团的呈色反应(续) 官能团的呈色反应(续) 二、制备衍生物测定熔点 测定衍生物缩氨基脲的熔点(续) （二）酯的水解 酯的水解(续) 三、紫外分光光度法 紫外分光光度法（续） 四、红外分光光度法 红外分光光度法（续） 红外分光光度法（续） 五、薄层色谱（TLC）法 薄层色谱法（续） 六、高效液相色谱（HPLC）法 第三节 特殊杂质检查 一、其他甾体的检查 其他甾体的检查（续） 其他甾体的检查（续） 二、硒的检查 四、游离磷酸盐的检查 第四节 含量测定 高效液相色谱法（续） 高效液相色谱法（续） 高效液相色谱法（续） 二、紫外分光光度法 三、比色法 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 比色法（续） 具有?4—3—酮基的甾体激素，在室温不到lh即可定量地与酸性异烟肼反应；其他甾酮化合物需在长时间放置或加热后方可反应完全，例如C20—酮化合物(黄体酮，可的松等)反应就很慢。C17—酮化合物也可发生反应并形成腙，Cll—酮在上述条件下不发生反应。具有共扼双键的另一些甾酮化合物，如?5—7—酮醋酸胆甾醇，在相当长的时间内反应仍不能完全。因此，在上述反应条件下，本法对?4—3—酮甾体具有一定的专属性。 (1)、氯化三苯四氮唑 （TTC） 氯化三苯四氮唑即为2,3,5—三苯基氯化四氮唑（2,3,5—triphenyltetrazolium chloride, i.e. TTC），为无色试剂，其结构为： (二)四氮唑比色法 1、四氮唑盐的种类 (2)、蓝四氮唑（Blue tetrazoline, i.e. BT） BT的化学名为3,3’—二甲氧苯基—双—4,4’—（3,5—二苯基）氯化四氮唑。该试剂为无色,其结构为： 四氮唑比色法是测量皮质激素的重要方法。基于C17-?-醇酮基（-CO-CH2OH）的还原性，在强碱性溶液中被TTC或BT氧化，而TTC或BT被还原为有色的甲（formazan）衍生物，其颜色随条件不同而产生差异，多为红色或蓝色。 2、反应原理 USP（23）采用蓝四氮唑，BP（1993）采用氯化三苯四氮唑，中国药典（2000）采用氯化三苯四氮唑。 氯化三苯四氮唑的还原产物为深红色的三苯甲，故称为红四氮唑（red tetrazoline，即RT），其?max为480~490nm，多数为485nm。蓝四氮唑的还原产物为暗蓝色的双甲，?max约为525nm。但是，按照美国药典规定的实验条件，几乎是定量形成BT单甲（红色），若将反应混合物加热，将生成BT双甲臢（蓝色）。 3、测定方法 (1)、基团影响 一般认为，C11—酮基的反应速度快于C11—羟基甾体；C21—羟基酯化后较其母体羟基的反应速度慢；当酯化了的基团为三甲基醋酸酯、磷酸酯或琥珀酸酯时，反应更慢。 4、讨 论 (2)、溶剂和水分的影响 含水量大时会使呈色速度减慢，则反应可采用无水乙醇。在含水量不超过5％时，对结果几乎无影响，因此也可采用95％乙醇。而醛具一定还原性，会使吸收度增高，故一般应采用无醛醇作溶剂。 (3)、碱的种类及加入顺序的影响 常采用的碱为氢氧化四甲基铵,且以先加四氮唑盐溶液再加碱液较好。有研究表明: 当皮质激素和氢氧化四甲基铵长时间(24h)接触后，皮质激素有部分分解。 (4)、空气中氧及光线的影响 反应及其产物对光敏感，因此必须用避光容器并置于暗处显色，同时在达到最大呈色时间后，立即测定吸收度。TTC法形成的甲对空气中氧敏感，明显影响颜色强度和稳定性，因