hCuZn-SOD基因的克隆、表达及其产物的初步纯化和表征.pdfVIP

第32卷第6勰 禳娴大学学报(自然科学版) 雌．32渤。6 ji坠垩!兰旦塾婴燕堡垒!!竺型跫i!曼望i!zl坠嫩熊塾i!翌!立 望竺：兰唑 hCuzn—SOD基因的克隆、表达及其产物的初步纯化和表征 陈春，陈躬瑞，期树滔，卢菀华，饶平凡 (福州大学杰物工程研究所，福建福州 350002) 摘要：隽获褥lleHz珏一sOD基霆，根据Ge翘鼢k孛入键锌越氧织物壤诧骜(瓤貔致一s∞萋嚣碱基I擎疑，设诗 扩增弓l物，角RT—PcR方法扶人的群细胞孛克隆出hcIlzn—SoD cDNA序列，并将它插入pucm—T载体中， 经过DNA序列测定证实，该片段序列的一个碱基发嫩突变(与报道基因相比)，引起其编码第116个氨基酸 由G变为D．采阕定向克隆的方法将hC“zn—s∞的cDNA片段竞隆列表达载体pGEX一嚣上，构建表达质 羧弗Ex—soD，势转纯大弱耱骜嚣毪|(转糙)。s璐一强GE分耩诞实，经耐s诱导，融会疆鑫湖一SoD获褥 高效波达．破碎菌体、上清经谷胱甘肽亲和层析初步纯化后，得到纯度达90％的目的鬣自．活性实验表明， GSIr—sOD具有擞物活性． 关键谰：人键／镑趣氧诧物艘亿酶；克隧；RT—PcR；表达；联会嚣叁；亲秘屡耨 孛黧分类号：钟8 文献标识码：A M|olecular ofhCuZn—SODand c10ing，exprI睽；sion i耄s d擒穗d烈喳za娃舳 p“删髓ryl瞰r主蠡c毽耄主傩and CHENChun，CHEN Gong—nli，UUShu—tao，l胚Wj哦一量lu8，RA0p主ng一觚 (h塔斑妇《Bi熊捌。影，＆zh锄攀赫v璐毋，轴癌蛐，F巧i繇350002，氇i黼) obtainthehCuzn—SOD tothefullcDNA娆一 Abst阳ct：To cDNA，plime璐weredesi朗ed∽colding fmmliver into intheGenB蛐k．Fullw鹕obtainedRT—PCR ceU，sllbcl帆ed quence gene by pUCm—T veelor8魏d b鹪es基垮蛀l糕￡ion se锤娃e转eed。l麓e鑫墩indic簌￡e氇珏圭凌e粒麟强e le醚ing8波》se《醢e躐粒重。巍e to c∞struct ofonearnino th矗t tll衄，to change acid(116)compa帕dpre、rio惦lyreported．And expression cDNAw酪insertedinto vector IPrG pla8midpGEX二SOD，hCuZn—SOD exp陀ssionpGEX一2T。Aner in纛娃cli强，the垴io珏p∞tei藏GsT—SODw鹅|lighly lec试ar 45 oftotalbacteri8l