胁迫下欧李 AOX 及 UCP 基因家族表达分析.pdfVIP

第4O卷 第1期 林 业 科 技 Vo1．40 NO．1 20 15年 1月 FoRESTRYSCIENCE TECHNoLoGY Jan． 2015 文章编号：1001—9499 (2015)01—0006—05 胁迫下欧李 AOX及 UCP基因家族表达分析 胡银松 高文蕊 王瑞芳 张宜欣 宋兴舜一 (东北林业大学生命科学学院，黑龙江 哈尔滨 150040) 摘要：在干旱和水杨酸 (salicylicacid，SA)胁迫下，检测欧李叶片中交替氧化酶 (alternativeoxidase，AOX)及解偶 联蛋白(uncouplingprotein，UCP)基因家族的表达情况，以期为两基因家族在胁迫下的作用提供基础研究的依据。 通过使用特异性引物和 SYBRGreenI，结合染料实时荧光定量 RT—PCR技术 ，以管家基 因actin基 因为参照基 因，采用相对定量的方法，对欧李叶片AOX家族及 UCP家族进行差异表达分析。研究结果表明，干旱胁迫时， AOX4、UCP3、UCP4和UCP5在 8天时表达量最大，之后有所下降；AOXIb、UCP1和 UCP2表达量不断升高直 到 12天达到峰值，而AOX1a和AOX2的变化并不明显。sA处理3天时，仅 UCP2的表达量有所上升，其他 AOX家族和UCP家族成员的表达量都不同程度下降。 关键词：欧李；交替氧化酶(AOX)；解偶联蛋 白(UCP)；RT—PCR；水杨酸 中图分类号：S662．3，S601 文献标识码 ：A 欧李 (Prunushumilis)，蔷薇科樱桃属矮生灌 量检测 ，旨在分析AOX家族及UCP家族各成 木果树，经济价值极高。其果肉可食，仁可入药， 员在胁迫环境下的表达水平，为进行以上两基因 茎可作为饲料和编织材料，开发利用前景非常广 家族的深入研究奠定基础 。 阔。同时，欧李在绿化美化环境、治理荒山沙漠、 防治水土流失等方面具有特殊效用，是干旱地区 1 材料与方法 生态环境建设的先锋树种_】J。 交替氧化酶(AOX)为线粒体内膜上呼吸链 中 1．1 试验材料 抗氰呼吸途径末端的氧化酶，广泛存在于高等植 3年生欧李幼苗 由北京怀柔县引进 ，移栽于 物、真菌、藻类、部分寄生虫及原核生物 中，它 东北林业大学生命科学院实验室进行盆载培养， 能够催化辅酶 Q氧化、氧分子还原产生 H，Ol3j。 室 内温度25cc，温度 40％，培养基质为黑土和蛭 解偶联蛋白(UCP)是位于线粒体 内膜的一种质子 石混合物 (黑土：蛭石 =2：1)；每周浇水 3次，以 转运蛋 白，可以使H 从线粒体内膜渗透到线粒体 水面没过基质 1cm为宜。在实验室内进行干旱胁 基质中，驱散质子梯度 ，使呼吸链 的氧化作用与 迫和 SA处理，分别在干旱胁迫 (停止浇水)0、4、 ADP的磷酸化作用解偶联 。AOX和 UCP在植 8、12天和 1mmol／LSA喷施处理 3天 (早晚各 1 物产热的过程、果实成熟的过程和增强植物抵御 次)时取样 ；样品采集后立即置于一80℃冰箱中保 逆境胁迫性能过程 中有着密切联系。逆境胁迫下， 存直至总 RNA提取 。 AOX和UCP共同形成抗氧化防御体系，保护植物 试验用其他材料 ：植物总 RNA抽提试剂盒和 线粒体免受氧化损伤 J。 目前，欧李的抗逆性研 PCR产物 回收试剂盒 (OmegaBio—Tek公司)； 究较少，无逆境下AOX和UCP表达分析的报道。 RNA清洁纯化试剂盒 (北京原平皓生物技术有限 因此，本研究采用荧光定量 PCR技术，通过对荧 公 司