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等电聚焦实例--分离猪胸腺素蛋白质 →样品收集（挤出聚胶，取其中一根，用15%三氯醋酸固定4—5小时，然后用0.5考马斯蓝染色1.5小时，醋酸液中脱色作为参考。） →样品分离（其余各管对照相应的位置切成小段，置于蒸馏水中放置过夜，让蛋白质+两性载体共同洗出。然后经葡聚糖聚胶G-50柱，以15毫升/小时、1小时就可以分开两性载体和蛋白质。） 用鸡卵类粘蛋白作为配基纯化胰蛋白酶 →洗脱液每10毫升分部收集。→合并活力峰的洗脱液→冷冻干燥→各胰蛋白酶纯品 3.洗涤 收集树脂，用水冲洗至洗液澄清，滤干，用2倍量1.4mol/L NaCl，搅拌2h，滤干。 4.洗脱 用2倍量3mol/L NaCl搅拌洗脱8h，滤干，再用1倍量3mol/L NaCl搅拌洗脱2h，滤干 5.沉淀 合并滤液，加入等量95%乙醇沉淀过夜。收集沉淀，丙酮脱水，真空干燥的粗品 在0℃的条件下，搅拌加入等体积的 0.2mol/L的醋酸钠溶液，再加入1/4体积 的1%的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）。 0℃的条件下放置30分钟，离心得沉淀物。 沉淀物除糖原操作 （1）沉淀物溶解在含0.001mol/L的EDTA + 0.01mol/L的 醋酸钠溶液中，加入等体积的2.5mol/L的K2HPO4， （2）不断搅拌下再加入等体积的乙二醇甲醚， （3）在0℃的条件下，放置30分钟，离心，得上清液。 离心清液除蛋白质操作 （1）离心清液中加入等量氯仿，反复振荡2—3次，直到中间界面无明显蛋白质层为止。（2）向清液中加入1/10体积的20%的醋酸钾、再加入2倍体积的-20℃的乙醇， （3）在0℃的条件下，放置1小时，离心，得白色沉淀物。 离心清液进行提取---离心清液中，加入等体积的0.2mol/L的三乙醇胺，1%的十二烷基磺酸钠（SDS） 0.002mol/L的乙二胺四乙酸二钠（EDTA、PH=9.0），搅拌均匀。再加入等体积的90%的苯酚（苯酚中 含0.2%的8-羟基喹啉）、再加入等体积的氯仿，室温振荡30分钟，3500r/min离心20分钟，除去沉淀物。 健康的猪、牛肝脏用生理盐水洗干净，切成小块，加入1-2倍量的0.1mol/L的NaCl-0.05mol/L的 柠檬酸 溶液，再加入 0.001%聚乙烯硫酸脂（PVS）和 0.1%的、PH=7.0的Triton溶液。用组织 捣碎机捣成匀浆，3500r/min，然后离心20分钟，除去沉淀物。 沉淀物进行反复洗涤操作 （1）沉淀物用0.1mol/L的醋酸钠溶液 （内含0.001mol/L的EDTA）洗涤。 （2）再用70%的乙醇溶液洗涤 （3）重复3-5次洗涤，直到没有泡沫。 沉淀物进行过滤式除菌操作---沉淀物用 （0.001mol/L的EDTA + 0.14mol/L的醋酸钠溶液）溶解，过滤式除菌操作。得无菌RNA溶液。 灌装，冻干，得无菌RNA纯品。 （四）三磷酸腺苷（ATP）的制备 提取法制备三磷酸腺苷（ATP）的生产工艺分6步： （1）绞碎提取 （2）钡盐形成， （3）汞盐形成 （4）除汞， （5）钠盐形成 （6）干燥 生产工艺略 （五）肝素钠、前列腺素E2、表皮细胞生长因子（EGF）的制备 1、肝素钠的制备 2、前列腺素E2（PGE2）的制备 3、表皮细胞生长因子（EGF）的制备 四、植物来源的药物的制备实例 （一）植物超氧化物歧化酶（植物SOD）的制备 （二）植酸钙镁与肌醇的制备 （三）植物不饱和脂肪酸的制备 （一）植物超氧化物歧化酶（植物SOD）的制备 植物SOD具有清除体内过量的超氧化自由基的功能，对于预防衰老、血管硬化等具有显著效果。 与动物性SOD相比，植物SOD具有明显的优点：（1）植物SOD分子量小，（2）植物SOD易透性好。 植物性SOD在保健品、化妆品等方面具有较高的应用价值。 植物SOD的资源品种有：（1）茶叶、（2）沙棘、（3）刺梨。 ★从茶叶中提取SOD的工艺 新鲜茶叶，用20g丙酮干粉+20g聚已内酰胺 +400ml、0.05mol/L、PH=7.8的磷酸钾 缓冲液研磨提取，得上清液。 用0.25倍体积的氯仿-乙醇沉淀杂质 （氯仿：乙醇=2：3），得上清液。 用丙酮沉淀，得粗酶沉淀物 用0.002mol/L、PH=7.8的磷酸钾缓冲液溶解 粗酶沉淀物，进行超滤浓缩，得浓缩酶液。 浓缩酶液上Sephadex G100柱进行凝胶过滤，得活性组份 活性组份用离子交换技术进行分离 （1）使用DEAE-纤维素柱 （2）柱体用0.002mol/L、PH=7.8的磷酸钾缓冲液进行平衡 （3）样品上柱 （4）用0.002--0.1mol/L、PH=7.8的磷酸钾缓冲液进行梯度洗脱 得SOD活性组分 浓缩、真空干燥，得茶叶SOD纯品 （二）植酸钙镁与肌醇的制备 植酸钙镁（菲