实验六叶绿体的分离与荧光观察解决方案.ppt

实验六 叶绿体的分离与荧光观察 授课人： 齐云峰 实验目的 1、通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法。 2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并熟悉荧光显微镜的使用方法。 实验原理 细胞器分离过程包括两个阶段：破碎细胞和细胞组分的分离 在等渗溶液中进行组织匀浆、分离 叶绿体的分离在等渗溶液（0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液）中进行 叶绿体的分离采用差速离心或密度梯度离心 利用荧光显微镜观察叶绿体的自发荧光和间接荧光（次生荧光） 常用的细胞破碎方法 离心分离技术 离心是分离细胞组分和生物大分子最常用的分离方法 不同的细胞器和分子有不同的体积和密度，可在不同离心力、不同介质中沉降分离。 分离各种细胞组分的方法主要有： 差速离心 密度梯度离心 速率-区带梯度离心 等密度离心 差速离心 采用逐渐提高离心速度或低速和高速交替进行离心，使各种沉降系数不同的颗粒在不同的离心速度及不同的离心时间下分批分离的方法。 操作过程中一般是起始离心速度较低，让沉降系数较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍悬浮在上清中。收集上清，改用较高转速离心，将较小颗粒沉淀。以此类推，达到分离不同大小颗粒的目的。 方法较简单，但分辨率不高。沉降系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开。 密度梯度离心 用一定的介质在离心管内形成一连续或不连