致病疫霉坏死基因克隆及功能分析.pdfVIP

7要；F一=i 农堂生蜘投币警报 ／ ．i org ：o。，r：…。…。 簇 枷㈣Onlin怎e abiot‰echgy 赫 s麓ystem：巍http：／搽／www ：璺；曼 致病疫霉坏死基因PcF／SCR．J『的克隆及功能分析 赵冬梅徐进杨志辉朱杰华+朱丽丹 1000 河北农业大学植物保护学院，保定07 26com +通讯作者，zhujiehua356@l 摘要PcF(尸五ytophthora 子。致病疫霉(Phytophthorainfestans)基因组学研究预测出了20个PcF／SCR(small 因，但其对寄主植物的致坏死功能尚未被证实。本研究选取其中编码蛋白被预测具有4个二硫键的基因 PcF／SCR．1(GenBank：XM nt 的全长cDNA，将其连入表达载体pBll21后，转化农杆菌(Agrobacterium benthamiana)，观察叶片症状。在注射接种后5d时叶片开始出现黄化，7d时叶片出现 本生烟(Nicotiana 严重皱缩和坏死症状，初步表明该基因具有致坏死功能。序列比对分析表明，Pc粥CR．J基因编码的蛋白 1个仅存在于PcF／SCR．1的 具有与PcF蛋白相类似的3个二硫键(C89和C99，C68和C100，C73和C104)_币11 的致坏死功能，利用试剂盒定点突变该基因编码蛋白的第99、100、104和110位上的半胱氨酸，构建缺失 二硫键突变体的重组质粒，并在本生烟中进行瞬时表达。仅突变110位半胱氨酸，或者同时突变99位和 110位两个位点的半胱氨酸时，PcF／SCR．，基因的致坏死功能并没有受到影响；当半胱氨酸的突变个数增 加到3个(C99／100／110A)或者4个(C99／100／104／110A)时，接种烟草叶片没有出现坏死症状，表明二硫键在 该基因在整个侵染过程中均有不同程度的上调，而且在接种48h时表达量达到最高值，说明该基因可作 h)通过 为毒素因子在病菌侵染马铃薯叶片的整个过程中都起作用，而且主要作用可能是在侵染后期(48 分泌大量的毒素蛋白来破坏寄主的防御系统进而促进自身的定殖。对PcF／SCR．，基因致坏死功能的研 究，有助于深入了解该基因在致病过程中的作用及机制，为PcF／SCR—like家族其他基因的功能研究提供 参考。 关键词PcF(Phytophthoracactorum—fragaria)／SCR．／(small andFunction of GenePcF／SCR．J Cloning Analysis Necrosis-inducing in鼢弘ophthorainfestans ZHAO XUJinYANGZhi—HuiZHUJie-Hua’ZHULi-Dan Dong—Mei ofPlant of 071 College Protection，AgriculturalUniversity 000，China Hebei，Baoding +Correspondingauthor，zhujiehua356@126．conl Abstract