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酶促反应动力学(Enzyme Kinetics) 反应进行的方向 反应进行的可能性 反应进行的限度 反应进行的速率 反应机制 影响反应速率因素包括: 酶浓度、底物浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂等。 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。 （一）. 酶促反应动力学基础 酶促反应速度一般在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示 反应速度取其初速度，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度 底物浓度远远大于酶浓度 1. 反应速率及其测定 2.反应分子数和反应级数 反应分子数 (1)单分子反应 A B (2)双分子反应 A+B C+D 速率与反应物浓度的一次方成正比。 ②二级反应 速率与反应物浓度的2次方（或两种物质的浓度的乘积）成正比。 平衡常数 平衡：可逆反应的正向反应和逆向反应仍在继续进行，但反应速率相等的动态过程。 反应的平衡常数与酶的活性无关，与反应速率的大小无关，而与反应体系的温度、反应物及产物浓度有关。 （二）底物浓度对酶反应速度的影响 1 中间络合物学说 中间产物的证据 中间复合物的直接观察 光谱改变 酶的物理性质改变 分离结晶 酶和底物的共沉降 2. 单底物酶促反应动力学 （2）.米氏方程的推导 ①．根据酶反应的中间复合物学说（快速平衡） 根据酶反应的中间复合物学说（快速平衡） 酶催化的反应中各成份的变化 稳态理论的假设 快速平衡假说与稳态平衡假说的实质区别 ①. v- [S]曲线：近似双曲线 ②．当[S]??Km（ [S]很小时）　　 　即v 与[S]成正比 ③．当[S]??Km（ [S]很大时） 　v ?Vmax，酶被底物饱和，v与[S]无关 ④．当v=1/2Vmax时， [S]＝Km（mol/L) A. Km值是酶的特征性常数。与酶的浓度无关，不同的酶，其Km值不同 B.物理意义:酶促反应速度为最大反应速度（Vmax)的一 半时的底物浓度。 F.根据正逆反应Km的差别及细胞内正逆两相底物的浓度推测酶促反应的正逆方向。 G.根据代谢途径中各个酶的Km及其相应底物浓度判断限速步骤。 H.根据Km值的大小判断分支代谢的流向。 Vmax和k3(kcat) Vmax不是一个常数，它取决于酶的浓度，它是一个酶反应体系的速度的极限值。 Vmax=K3 [E] K3代表酶被底物饱和时每秒钟每个酶分子转换底物的分子数，称为转换数或催化常数， （ catalytic constant,Kcat）。Kcat值越大，表示酶的催化效率越高。 Kcat/Km (4) 作图法测定Km和Vmax Lineweaver-Burk 双倒数作图法 Hanes-Woolf作图法 Woolf-Augustinson-Hofstee作图法 Eisenthal－Cornish-Bowden作图法 Lineweaver-Burk 双倒数作图法 实例 Neurospora crassa 的D-丝氨酸脱水酶催化反应： CH2OH · CHNH2 · COOH ? CH3CO · COOH+NH3 在实验中测定酶的饱和曲线得到下列数据： [s] v ?10 -5（M） 20分钟生成丙酮酸（?M） 0.20 0.150 0.40 0.200 0.85 0.275 1.25 0.315 1.70 0.340 2.00 0.350 8.00 0.360 用这