大孔载体固定化脂肪酶.pdfVIP

第 7 卷第 4 期 过 程 工 程 学 报 Vol.7 No.4 2007 年 8 月 The Chinese Journal of Process Engineering Aug. 2007 大孔载体固定化脂肪酶 蔡宏举， 付大雁， 王满意， 周 鑫， 谭天伟 (北京化工大学生命科学与技术学院，北京市生物加工过程重点实验室，北京 100029) 摘 要：用自制大孔载体固定化脂肪酶，对固定化条件进行了优化，比较了固定化酶与游离酶的酶学参数. 结果表明， 酶粉与载体质量比为 1:1、固定化温度在20∼25 ℃之间、固定化时间 1.5 h 的条件下，所得固定化酶的酶活最高. 固定 化酶的最适 pH 为 8.5，最适温度为 40 ℃，其热稳定性、操作稳定性都比游离酶高，4 ℃下保存 7 d 后，酶活仍剩余 94%. 关键词：大孔载体；脂肪酶；固定化酶 中图分类号：Q814.2 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2007)04−0773−05 1 前 言 2 实 验 脂肪酶(EC3.1.1.3)是一类特殊的酰基水解酶，能够 2.1 材料和仪器 在油−水界面催化酯水解或醇解、酯合成、酯交换、多 假丝酵母(Candida sp. 99-125) 脂肪酶，酶活约 肽合成等反应，在制药、试剂、食品加工、生物能源等 13000 U/g，实验室自产；甲基丙烯酸缩水甘油酯，纯 方面有着很大的应用潜力[1,2]. 由于游离酶不易回收，很 度大于 96%，美国 ACROS 公司；二乙烯基苯(含量 56%， 难重复利用，限制了其大规模应用. 因此脂肪酶催化技 用 5%的NaOH 预处理，洗去阻聚剂等杂质) ，淄博嘉龙 术的应用在一定程度上取决于固定化技术. 目前固定化 化工科技有限公司；纳米碳酸钙(粒径小于 80 nm)，广 载体的研究主要集中在多孔粉体材料[3] ，如介孔材料 东嘉维化工实业有限公司；其他试剂均为分析纯. [4] [5] [6] MCF , MCM-41 等. Pandya 等 发现，孔径较大的 StereoScan-250-MK3 扫 描 电 镜 , Cambridge; MCF(15.3 nm) 的酶固定化比孔径小的MCM-41(2.6 nm) Porosimeter PASCAL 140240 压汞仪，Thermo Electron 效果好. 这是因为酶更易被固定在孔径较大的孔内，提 Corp., USA ；Multyskan Spectrum 酶标仪，Thermo 高了单位载体上酶的固载量，因而提高了单位酶活. 黄 Labsystems ；GC-2010 气相色谱，日本岛津公司. 磊等[7] 以微孔陶瓷载体固定化脂肪酶，仅对部分改性条 2.2 实验方法 件优化的情况下，固定化酶活就已经与高贵等[8]用无孔 2.2.1 载体的制备 硅藻土固定化脂肪酶的酶活相当. 但脂肪酶是大分子， 量取甲基丙烯酸缩水甘油酯 5 mL，二乙烯基苯 2 如果载体孔径小，将会影响固定化过程中酶与载体内部 mL ，甲苯和正庚烷各 3.5 mL，称取 7 g 纳米碳酸钙，与 的传质，也会影响固定化酶催化反应时底物与脂肪酶间 上述液体一起放于 50 mL 的三角瓶中，反复超声混合 的传质过程. 如果在固定化介质中增加大孔分布，