转化子的筛选与重组子的鉴定概述.pptVIP

转化子的筛选与重组子的鉴定 为什么要进行转化子的筛选和重组子的鉴定？ 在DNA体外重组实验中，外源DNA片段与载体DNA的连接反应物一般不经分离直接用于转化，再加上重组率和转化率的不理想，因此必须通过筛选和鉴定来区分转化子与非转化子、重组子与非重组子、期望重组子与非期望重组子。 转化子：接纳载体或重组分子的转化细胞。 非转化子：为接纳载体或重组分子的非转化细胞。 重组子：含有重组DNA分子的转化子。 非重组子：仅含有空载载体分子的转化子。 期望重组子：含有目的基因的重组子。 非期望重组子：不含目的基因的重组子。 三者的关系 转化子的筛选与重组子的鉴定方法 基于载体遗传标记的筛选与鉴定 　　利用载体DNA分子上所携带的选择性遗传标记基因筛选转化子或重组子 基于克隆片段序列的筛选与鉴定 　　由于基于载体遗传的筛选与鉴定程序不能区分期望重组子与非期望重组子。在大多数情况下，待克隆的目的基因或DNA片段的序列至少部分是已知的，因此根据克隆片段序列设计的筛选与鉴定程序具有广泛的实用性 基于外源基因表达产物的筛选与鉴定 　　如果克隆在受体细胞中的外源基因编码产物是蛋白质，则可通过检测这种蛋白质的生物功能或结构来筛选和鉴定期望重组子 噬菌斑筛选法 PCR鉴定法 PCR技术的两大主要用途为目的基因的获得和DNA特定序列的检测。根据引物互补区