零背景平末端快速连接试剂盒-南京钟鼎生物技术有限公司.pdfVIP

零背景平末端快速连接试剂盒 Cat. No: ZV39 南京钟鼎生物技术有限公司 南京市玄武区孝陵卫双拜巷78 号紫金山创业园A 座 联系电话： 400-025-1124 传 真： 025 电子邮件： order@ 网 址： 产品规格： 产品货号 规格 ZV39-20T 20 次 ZV39-40T 40 次 产品储存： 本产品可在-20 ℃保存6 个月 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 20 次 40 次 pZERO-Blunt Vector(40ng/l) 20l 40l 900bp Control （40ng/l） 5l 5l 2 Quick Ligation Buffer 100l 200l T4 DNA ligase, 5U/ l 20l 40l pZERO-Blunt Forward Sequencing Primer (10µM) 50l 100l pZERO-Blunt Reverse Sequencing Primer (10µM) 50l 100l 产品简介： 零背景平末端快速连接试剂盒是一种先进的自杀基因阳性选择克隆系统，可以高效克隆 平末端 PCR 产物和任何具有平末端的 DNA 片段。该试剂盒对磷酸化或非磷酸化的 DNA 片段都有效。 阳性选择载体和插入片段连接仅需 5 分钟即可获得超过 95% 的阳性重组克 隆。由具有校正活性的聚合酶（如：Pfu polymerase ）扩增的平末端PCR 产物可直接连入克 隆载体。连接产物可直接转化常用的大肠杆菌菌株。 试剂盒提供一个新颖的自杀基因阳性选择克隆载体 pZERO-Blunt 。该载体含有致死的 自杀基因（内含多克隆位点），当载体与片段连接成功，自杀基因无法正确表达，包含重组 子的细胞可以正常生长；当载体与片段连接不成功，载体自连后自杀基因正确表达，包含自 连空载体的细胞无法存活，即“零 ZERO”背景。这种阳性筛选策略无需蓝白斑筛选，极大地 加速了克隆筛选进程。 为方便酶切作图和插入片段基因操作， pZERO-Blunt 克隆载体的多克隆位点两侧各包 含一个 BglII 识别序列。此外，该载体含有 T7 启动子，可用于体内或体外转录、插入片 段测序等研究。 操作步骤： 1. 连接反应的准备： 平末端PCR 产物或者酶切后平末端片段可以通过琼脂糖凝胶电泳分离回收（使用长波 紫外光下切胶或者可见光透射切胶避免DNA 损伤造成连接失败）。与载体的摩尔比是 3:1 。 本公司生产的DNA 产物快速纯化回收试剂盒对70bp 以上的DNA 片段能很好地进行回收。 2. 快速连接反应： 1) 在一个标准的 10l 连接反应体系中，加入 1l 40ng pZERO-Blunt 载体、X l PCR 产物 (在通常状况下，没有必要对PCR 产物进行精确定量，一般 PCR 产物与载体的摩尔比 优化至 1:1~10:1 就可以得到良好结果，推荐3:1 ，见附录) 、5l 2 Quick Ligation Buffer 和0.9l 的T4 DNA Ligase ，其余用灭菌水补足。 反应按以下体系进行： 5l 2 Quick Ligation Buffer 1l