应用基因表达谱片研究mnng诱致小鼠胚胎畸形肢体基因表达的变化.pdf

应用基因表达谱芯片研究MNNG诱致小鼠 胚胎畸形肢体基冈表达的变化 中文摘要 {一般估计，大约3％的新，E儿出牛时有严重的先天畸形。我国出乍监测资料 f 显示碡年有30一40厅缺陷儿出乍。出生缺陷发q三原闲包括遗传因素和环境因素， 环境因素中化学物致畸¨益受到人们重视。化学物致畸是可以采取措施加以控制 和预防的，凼此岛通量地筛检致畸物，阐明化学致畸作用的分子机制，建立快速 准确鉴定人类致畸物的方法和种间外推方法，是发育毒理学面临的迫切任务，其 核心是致畸作用分子机理的问题。胚胎发育中，发育基因选择性表达决定胚胎的 生长和发育过程，同样，基阕的表达谱改变将导致发育异常。所以建立理想的动 物模型，从全基因组水平比较正常和异常发育的基因表达谱可望为阐明化学物所 y百，一。 致异常发育的分子机制、种间外推和防治找到突破口。)本研究采用可导致肢体畸 ， 形的已知致畸物N。甲基一N’．硝硅．N一甲基哑硝基胍(MNNG)作为受试物，诱发 小鼠肢体的异常发育表型，然后用基吲表达谱芯片观察畸形肢体和相应正常器官 的基闪表达潜改变。目的是为筛检特异畸形的相关基因、为化学物致畸作J刳的分 子机制提供科学依据。 一、MNNG致小鼠肢体异常发育模型的建立． ／ 淆椎动物肢体由于其特殊的形态结构，被认为是研究胚胎发育过稗中形态模 ＼ 式形成的细胞和分子机制的最有效模型之一。MNNG为一L二知的致突变性致畸 物，可诱发小鼠的多脏器畸形包括肢体畸形，何不同时间和荆蓉暴露所诱发的j： ＼，彳一+ 要畸肜类氆和发乍#-4c同，)本研究采用[CR小鼠为受试动物，通过脱察小同剂 豪MNNG和不同给药时间胎鼠畸形率、畸形类型等指标，建蕾r化学物诱发的 ， 特异的肢体畸形模型。(其最适诱发条件为孕期第12天一次以40m∥kg体重给产 MNNG，胎鼠畸彤类跫以肢体畸彤为差，日．以短指(趾)和缺指(趾)最为常见。 、／丁一 叫肢畸形的发生率和畸形严重程度依次为定后肛前右后存前j此模型的建 ／ 、7小仅为研究肢体异常发育耐几．也为胚胎异常发育过程中形态学模式形成的分 了机制研究提供r良好的模硭。 、应用基因芯片研究MNNG致小鼠畸形肢体中基因表达谱改变． 本研究心』}j禽何8192个小鼠靶基因的表达谱芯片对孕期笫14、16人小H 发宵时faj的小鼠胚胎畸形肢体和相应对照组IF常肢体的毖I划表达情况进行观 察。通过组织mNNA分离纯化、表达谱探针制备、杂交、荧光扫描和结粜的 ， 《 比甫287条差异表达肇斟，第16天组织有88条差异表达罐㈥：2、第14氏科I 笫16天差异表达基因中均为卜I调基因占大多数，这弓肢体异常{：要表现为缺、 短指、趾和短肢的结果是一致的：文通过对某些已知功能研究基冈的分析+ 发现受影响导致基因表达改变的多数为与细胞剧期、转泵调控、结构篮自村j关 基闪，4、发现有D~A损伤修复基冈和参与p53介导细胞凋J、：的荩冈表达增高， 说}1jjⅥN＼(j诱芨的肢体畸形中有州^损伤和细胞凋亡的增加：j、发观彳丁些‘j精 于，仨成有关和睾丸中特异性表达的基因在正常和异常肢体发育中有表达，i耵n． A肢体异常发育中有表达改变，提示这些基闪的差异表达与肢体异常发行行 关。另外，还筛选r有些未知功能的肢体异常发育相关的基岗。本研究结果为 、 ／一一 揭示肢体异常发育的分子机制和今后进一步的研究提供j’科学依据。}—矿 onthe ofabnormal