朱明华版第三章液相色谱详解.pptVIP

* 2.1、分配色谱中的流动相选择规律 正相色谱中，以低极性溶剂如正己烷、苯、氯仿为底剂；反相色谱中，以不同比例混合而成的甲醇/水、乙腈/水冲洗体系是最常见的，二元溶剂系统，在甲醇/水、乙腈/水体系中加入适量的四氢呋喃组成三元溶剂系统可以进一步提高冲洗强度，三种溶剂所具有的洗脱能力几乎可以解决所有样品的洗脱问题. * 2.2、离子交换色谱 在水介质中进行，组分的保留值用流动相中盐的浓度和PH值控制。流动相离子类型对组分的保留能力有较大影响。 * 2.3、排阻色谱 溶剂要与凝胶本身相似，对于软质凝胶，溶剂必须能溶胀凝胶。常用溶剂有：氯仿、甲醇、水、缓冲盐溶液、四氢呋喃、间苯三酚等。 * 第四节 影响分离的因素与操作条件的选择 factors influenced separation and choice of operation condition 第三章 高效液相色谱分析法 High Performance Liquid Chromatograph * 一、影响分离的因素 1. 影响分离的因素与提高柱效的途径 在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即： H = A + C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。 2 0.5 * 液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 一、影响分离的因素 * 要正确地选择色谱分离方法，首先必须尽可能多的 了解 样品的有关性质，其次必须熟悉各种色谱方法的主要特点及其 应用范围。选择色谱分离方法的主要根据 是样品的相对分子质 量的大小，在水中和有机溶剂中的溶解度，极性和稳定程度以 及化学结构等物理、化学性质。 1、相对分子质量 对于相对分子质量较低（一般在200以下），挥发性比 较好，加热又不易分解的样品，可以选择气相色谱法进行分析 。相对分子质量在200 ~ 2000的化合物，可用液固吸附、液-液 分配和离子交换色谱法。相对分子质量高于2000，则可用空间 排阻色谱法。 二、分离类型选择 * 2. 溶解度 水溶性样品最好用离子交换色谱法和液液分配色谱法；微溶于水，但在酸或碱存在下能很好电离的化合物，也可用离子交换色谱法；油溶性样品或相对非极性的混合物，可用液-固色谱法。 3. 化学结构 若样品中包含离子型或可离子化的化合物，或者能与离子型化合物相互作用的化合物（例如配位体及有机螯合剂），可首先考虑用离子交换色谱，但空间排阻和液液分配色谱也都能顺利地应用于离子化合物；异构体的分离可用液固色谱法；具有不同官能团的化合物、同系物可用液液分配色谱法；对于高分子聚合物，可用空间排阻色谱法。 二、分离类型选择 * 二、分离类型选择 高效液相色谱仪应用实例 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 1. 环境中有机氯农药残留量分析 2. 稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 高效液相色谱仪应用实例 高效液相色谱仪应用实例 3. 阴离子分析 双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱(3×250mm), 流动相：0.003mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1 Na2CO3，流量138 mL/h。 七种阴离子在20分钟内基本上得到完全分离. 掌握 1、HPLC与GC异同（分离原理、仪器组成、应用范围） 2、五种常见液相色谱分离原理（液-液、液-固、离子对、离 子交换、分子排阻） 3、基本概念：正相色谱、反相色谱、梯度洗提、化学键合固 定相 4、色谱分离条件的选择 * 高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、