2014-11-28ELISA结果判读(陈玉凤)解读.ppt

定性测定　　　定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出有或无的简单回答，分别用阳性、阴性表示。阳性表示该标本在该测定系统中有反应。阴性则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。 在间接法和夹心法ELISA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。 定量测定 ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数纸，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。 测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。ELISA测定的标准曲线注意图中横坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达。 定量测定的结果判定是每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线，根据标本的吸光度值不同来确定待测物的浓度。 在间接法和夹心法ELISA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。 灰区概念 把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念，即将CO值上下的一段区域定为阳性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴阳性，如仍落在灰区范围内则报告+（阳性）。 灰 区 谢谢！ 版式说明： 1.中文标题 字体：微软雅黑 字号：40pt加粗（可根据文字长短变动） 颜色：蓝色 2.副标题 字体：微软雅黑 字号：24pt（可根据文字长短变动） 颜色：蓝色 3.演讲人、日期 字体：微软雅黑 字号：18pt 颜色：黑色 * A.阳性判定值： （cut-off value）一般为阴性对照A值加上一个特定的常数(0.05)，以此作为判断结果阳性或阴性的标准。 * 城乡对口支援临床检验技术标准制定及培训 会议主题 :ELISA结果的判定 演讲人：陈玉凤 2014.11.28 内 容 ELISA的概念 酶联免疫吸附试验的反应原理 常见问题原因分析 结果的报告解释 　　　　 　　　　 ELISA的概念 ELISA属于标记免疫学技术的一种，1971年由荷兰和瑞典的学者提出，操作过程简单易行并可以定量，从而使其在免疫学检测中得到了广泛的应用。 ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA） 。基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。 敏感性 化学比色法的敏感度为mg/ml水平 酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml 免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿 标记的免疫敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平 例如，HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml。 常见问题 ELISA技术掌握不好----较大的技术难题 白 板 花 板 灰 区 假 阴 性 假 阳 性 白 板 花 板 均 板 ELISA检验方法相关项目 乙肝五项 丙肝抗体 梅毒抗体 HIV TORCH EB SCC ELISA 常见类型 1.双抗体夹心法（用于测抗原）HBsAg 2.间接法（用于测抗体） HBsAb 3.竞争法（用于测小分子抗原/半抗原和抗体）HBeAb 4.捕获法（用于测血清中某抗体的亚型）特异IgG 一般情况下的双抗 体夹心法ELISA反应 抗原过量时 一步法ELISA反应会出现钩状效应 钩状效应（hook effect） 钩状效应 强阳性----------------假阴性 方法：稀释后再测 特点：不易发现 避免：结果回顾、诊断提示、临床沟通 抗原的纯度对间接法测抗体的影响 正常血清中所含的高浓度的非特异性抗