第十六章经典液相色谱法.ppt

* 第四节经典液相色谱法 流动相 　　水为溶剂的缓冲溶液。 应用 去离子水的制备，天然药物化学成分的分离，各种有机酸、氨基酸的分离制备，抗生素的纯制、去除干扰离子、测定某些盐类的含量等。 * 第四节经典液相色谱法 （四）空间排阻柱色谱法 （分子阻排色谱法） 固定相　 多孔性凝胶，常用葡聚糖凝胶。 选择凝胶时应使试样的相对分子量落入凝胶的相对分子质量范围内。 流动相 　 一般水溶性试样选择水溶液为流动相，而非水溶性试样则选择四氢呋喃、氯仿、甲苯等有机溶剂为流动相。 * 第四节经典液相色谱法 应用 　　天然药物化学和生物化学的研究，水溶性高分子化合物如蛋白制剂等的分析。 * 第四节经典液相色谱法 二、平面色谱法 （一）薄层色谱法 薄层色谱法是将固定相（如：吸附剂）均匀地涂铺在光洁的玻璃板、塑料板或金属板上形成薄层，在薄层板上进行分离分析的方法。 分离机制 　与吸附柱色谱的分离机制相似。 * 第四节经典液相色谱法 比移值与相对比移值 　 比移值（retardation factor，Rf）：　 L0 原点 溶剂前沿 A B L1 L2 Rf的测量示意图 * 第四节经典液相色谱法 Rf可用范围是0.2～0.8，最佳范围是0.3～0.5。 相对比移值（relative retardation factor，Rr） Rr可以大于1，也可以小于1。 * 第四节经典液相色谱法 操作方法 操作程序可分为制板、点样、展开、斑点定位等。 定性和定量分析 　 定性分析： 利用Rf或Rr进行定性。 定量分析----处于半定量或限量检查阶段 常用的定量方法有目视比色法、洗脱法和薄层扫描法。 * 第四节经典液相色谱法 应用 　适用于有机化合物的分离与鉴定，也可用于小量物质的提纯与精制。在药学领域中，可用于测定药品纯度和检查降解产物；判断药品合成反应进行的程度、监控反应历程；分离和测定天然药物的有效成分。 　 * 第四节经典液相色谱法 （三）纸色谱法 纸色谱法是以纸为载体的平面色谱法。 分离机制 　属于分配色谱的范畴 ，根据溶质在两相间分配系数差异而分离。 　一般为正相色谱，化合物的极性越大或亲水性越大，则分配系数越大，Rf越小；化合物的极性越小或亲脂性越强，则分配系数越小，Rf越大。　　　　　　　　　　 * 第四节经典液相色谱法 化合物一定时，展开剂的极性越大，化合物的分配系数越小，Rf越大；展开剂的极性越小，化合物的分配系数越大，Rf越小。 固定相与展开剂 　　　　　　　　　　 固定相 一般为纸纤维及其吸着的水。 展开剂（流动相） 常为一些含水的有机溶剂。 * 第四节经典液相色谱法 实验方法 1、色谱滤纸的选择 应满足： 　纯净，无明显荧光斑点。 均匀无痕，有一定的机械强度。 纸纤维松紧适宜。 应针对分离组分及分离分析目的选择合适的滤纸型号。 * 第四节经典液相色谱法 点样 与薄层色谱法相似。 展开 展开剂的选择主要考虑欲分离物质在两相中的溶解度和展开剂的极性。 常用上行展开方式展开。 * 第四节经典液相色谱法 斑点的定位 与薄层色谱法相似，应注意：纸色谱不能使用具有腐蚀性的显色剂，以免腐蚀滤纸；也不能在高温下显色。 定性和定量分析 定性方法同薄层色谱法。 定量方法则采用剪洗法，亦可采用目视比色法作半定量分析。 * 本章结束! 谢谢! 分析化学（第2版） 全国高职高专药品类专业卫生部“十一五”规划教材 全国高职高专药品类专业卫生部“十一五”规划教材 分析化学（第2版） * 第十六章 色谱法基本概念及经典液相色谱法 第2节 第3节 第4节 * 第一节概 述 第一节 色谱分析法概述 色谱法（chromatography）是一种根据物质的物理或物理化学性质不同而进行分离分析的方法。 * 第一节概 述 一、色谱法的发展概况 色谱法的创始人是俄国植物学家茨维特Tsweet。 20世纪30与40年代相继出现了薄层色谱和纸色谱，与柱色谱一起统称为经典的液相色谱法，使色谱法成为一门分离技术。 20世纪 50年代气相色谱的兴起，使色谱法在理论、仪器以及分离与“在线”分析等方面得到长足发展，奠定了现代色谱法的基础。 * 第一节概 述 20世纪 70年代高效液相色谱的崛起，弥补了气相色谱不能直接用于分析难挥发、对热不稳定及高分子试样等方面的不足，拓宽了色谱法的应用范围，成为色谱发展史上又一个里程碑 。 20世纪 80年代是色谱迅猛发展的重要时期，相继出现了液相色谱的各种联用技术 。 经过一个多世纪的发展