2010实验五六大肠杆菌感受态的制备、重组DNA的转化和抗药性筛选-教案.pptVIP

大肠杆菌感受态的制备、重组DNA的转化和抗药性筛选 朱文博 中山医学院 基因克隆(又名分子克隆，DNA克隆)(gene cloning) 通过体外重组技术,将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细胞，扩增形成大量子代分子的过程。 基因克隆的核心----体外重组(Recombination) : 人工将一段目的DNA插入一个载体的过程。  重组DNA技术(又名基因工程) (recombinant DNA technology ) 定义： 实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称为重组DNA技术，又称基因工程。 广义的基因工程指按人们意愿设计，通过改造基因或基因组而改变生物的遗传特性。如用重组DNA技术，将外源基因转入大肠杆菌中表达，使大肠杆菌能够生产人所需要的产品；将外源基因转入动物，构建具有新遗传特性的转基因动物；用基因敲除手段，获得有遗传缺陷的动物等。 1 感受态(competent) 宿主细胞处于容易吸收外源性DNA的状态，处于感受态的细胞称为感受态细胞. 1.1 制备感受态细胞的原理 正常细胞都有细胞膜（细菌还有细胞壁）作屏障，对外源分子选择性接受。在实验中通过一定的理化条件使细胞通透性增大，处于感受态。 1.2 制备感受态细胞和转化的常用方法 2 CaCl2法制备感受态