第十四章 色谱分析法导论.pptVIP

色谱法早在1906年由俄国植物学家茨维特分离植物色素时采用的一种方法。 2、基线 是柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号的记录值，即图18－3中O—t线．稳定的基线应该是一条水平直线． 基线、噪音和漂移 基线：当没有待测组分进入检测 器时，反映检测器噪音随 时间变化的曲线（稳定—平 直直线） 噪音：仪器本身所固有的，以噪音 带表示（仪器越好，噪音越小） 漂移：基线向某个方向稳定移动 （仪器未稳定造成） 4、区域宽度 (1) 标准偏差σ (2)半峰宽Ｈ1/2 （3)峰底宽度 Y = 4σ 相对保留值γ2.1 (选择因子α） 某组份2的调整保留值与组份1的调整保留值之比，称为相对保留值： 1. 分配系数K 指在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值，即 2.分配比k’（容量因子） 指在一定温度和压力下，组分在两相间分配达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比。即 k’值越大，说明组分在固定相中的量越多，相当于柱的容量大，因此又称分配容量或容量因子。它是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数。k值也决定于组分及固定相热力学性质。它不仅随柱温、柱压变化而变化，而且还与流动相及固定相的体积有关。 3. 分配系数K与分配比k’的关系 其中β称为相比率，它是反映各种色谱柱型特点的一个参数。例如，对填充柱，其β值一般为6～35；对毛细管柱，其β值为60～600。 4. 分配系数K及分配比k与选择因子α的关系 如果两组分的K或k值相等，即α=1，两个组分的色谱峰必将重合，说明分不开。两组分的K或k值相差越大，则分离得越好。因此两组分具有不同的分配系数是色谱分离的先决条件。 色谱分析的目的是将样品中各组分彼此分离，组分要达到完全分离，两峰间的距离必须足够远，两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定的，即与色谱过程的热力学性质有关。但是两峰间虽有一定距离，如果每个峰都很宽，以致彼此重叠，还是不能分开。这些峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定的，即与色谱过程的动力学性质有关。因此，要从热力学和动力学两方面来研究色谱行为。 二、色谱分离的基本理论 1、塔板理论 最早由Martin等人提出塔板理论，把色谱柱比作一个精馏塔，沿用精馏塔中塔板的概念来描述组分在两相间的分配行为，同时引入理论塔板数作为衡量柱效率的指标。 该理论假定： （i）在柱内一小段长度H内，组分可以在两相间迅速达到平衡。这一小段柱长称为理论塔板高度H。 （ii）以气相色谱为例，载气进入色谱柱不是连续进行的，而是脉动式，每次进气为一个塔板体积（ΔVm）。 （iii）所有组分开始时存在于第0号塔板上，而且试样沿轴（纵）向扩散可忽略。 （iv）分配系数在所有塔板上是常数。 为简单起见，设色谱往由5块塔板（n＝5，n为柱子的塔板数）组成，并以r表示塔板编号，r=1，2…，n－l；某组分的分配比k=1. 图示 由塔板理论可建流出曲线方程： 由塔板理论可导出n与色谱峰宽度或峰底宽度的关系： 而理论塔板高度（H）即： 从上两式可以看出，色谱峰越窄，n就越大，而H就越小，柱效能越高。因此，n和H是描述柱效能的指标。 通常填充色谱柱的n＞103，H＜1mm。而毛细管柱 n=105--106，H＜0.5mm 由于死时间tm包括在tR中，而实际的tm不参与柱内分配，所计算的n值很大，H很小，但与实际柱效能相差甚远。所以，提出把tm扣除，采用有效理论塔板数n有效和有效塔板高H有效评价柱效能。 练习 例1：在柱长为2m的5%的阿皮松柱、柱温为1000C，记录纸速度为2.0cm/min的色谱条件下，测定苯的保留时间为1.5min，甲苯的保留时间为2min，两者的半峰宽均为0.20cm，求苯和甲苯的理论塔板数。 解： 小结 1．塔板理论的贡献： 从热力学角度解释了色谱流出曲线的形状和浓度极大点 的位置； 阐明了保留值与K的关系； 提出了评价柱效高低的n和H的计算式。 在比较相似柱的柱效时有用 须在给定条件，指定组分测定时才有意义 3. 存在问题: 1）做出了四个与实际不相符的假设 忽略了组分在两相中传质和扩散的动力学过程 2）只定性给出塔板高度的概念