高效液相色谱法环课件.pptVIP

* 2. 根据溶解度选择 ? 弄清样品在水、异辛烷、苯、四氯化碳、异丙醇中的溶解度是很有用的。 8.4 分离类型的选择 ? 如果样品可溶于水并属于能离解物质，以采用离子交换色谱为佳； ? 如样品可溶于烃类（如苯或异辛烷），则可采用液-固吸附色谱； * 2. 根据溶解度选择 8.4 分离类型的选择 ? 如样品溶解于四氯化碳，则多采用常规的分配和吸附色谱分离； ? 如样品既溶于水又溶于异丙醇时，常用水和异丙醇的混合液作液-液分配色谱的流动相，以憎水性化合物作固定相。 * 8.4 分离类型的选择 3. 根据分子结构选择 ? 酸、碱化合物用离子交换色谱； ? 脂肪或芳香族用液-液分配色谱、液一固吸附色谱； ? 异构体用液-固吸附色谱； ? 同系物不同官能团及强氢键的用液-液分配色谱。 气相色谱与高效液相色谱的比较 气相色谱 高效液相色谱 1. 只能分析挥发性物质，只能分析 20%的化合物2. 不能用于热不稳定物质的分析3. 有很灵敏的检测器如ECD和较灵敏的通用检测器（FID和TCD）4. 流动相为气体，无毒，易于处理 5. 运行和操作容易 6. 仪器制造难度较小 1. 几乎可以分析各种物质  2. 用于热不稳定物质的分析 3. 没有较高灵敏通用检测器 4. 流动相有毒，费用较高 5. 运行和操作比GC难一些 6. 仪器制造难度大 * * 第八章 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography (HPLC) * 第八章 高效液相色谱法 8.1 高效液相色谱仪 8.2 主要分离类型和原理 8.3 影响分离的因素 8.4 分离类型的选择 * 8.1.1 示例 8.1.2 结构 8.1.3 主要部件 8.1 高效液相色谱仪 * 8.1.1 示例 * 8.1.1 示例 * 8.1.1 示例 储液瓶 高压泵 进样器 色谱柱 检测器 废液 8.1.2 高效液相色谱仪结构流程 高压输液泵、高效分离住、高灵敏度检测器 * 色谱柱 进样器 泵及控制器 数据处理及控制 在线脱气机 检测器 1、 高压输液系统（高压泵） 要求： 输出压力高； 平稳、脉冲小； 流量稳定可调； 耐腐蚀。 机械往复柱塞泵结构图 8.1.3 主要部件 * 2. 进样系统 ? 直接注射进样：操作方便，可获得高的柱效，但不能承受高压； 进样方式 ? 高压六通阀进样：进样量的可变范围大，耐高压，易于自动化。是目前普遍采用的进样方式。 * 高压六通阀进样 * 流动相：液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。 液体或混合液体,除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争。 3. 梯度洗脱装置 * 选择原则： 极性大试样—极性较强溶剂； 极性小试样—弱极性溶剂。 在液相色谱中,可以通过改变流动相的组成、极性来改善分离和调节出峰时间。 通过改变流动相的组成来调整组分的k值，改变分离因子α值，以达到最短时间内得到最佳分离的目的。 梯度洗脱 梯度洗脱的特点 ?改善分离, 加快分析速度； ?改善峰形, 减少拖尾; ?可能引起基线漂移。 * 高压梯度（外梯度）: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 * 低压梯度（内梯度）: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。较多采用。 * 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 4. 色谱柱 * 5. 检测器 类型 紫外检测器 示差折光检测器 荧光检测器 电化学检测器 电导检测器 （一）、紫外检测器 —应用最广泛的检测器 基本原理：试样组分对特定波长的紫外光具有选择性的吸收，吸光度与试样组分浓度之间的定量关系符合郎伯-比耳定律。 优点： 对流速和温度变化不敏感； 可用于梯度洗脱。 缺点： 无紫外-可见吸收组分不响应； 流动相选择受一定限制。 （二）、示差折光检测器 —通用型检测器 基本原理：连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光系数差值，该值与试样池流动相中的组分浓度成正比。 每种物质具有不同的折光指数。 应用：生命科学中各类糖类化合物，没有紫外吸收，一般要用示差折光检测器。 缺点： 灵敏度低； 对温度敏感； 不能用于梯度洗脱。 （三）、荧光检测器—专用型检测器 基本原理：在一定的条件下，荧光强度与流动相中的组分的浓度成之比。 应用：对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。 特点： 高灵敏度； 高选择性； 可用于梯度洗脱。 *