Epigenetic Transgenerational Actions of Endocrine Disruptors and Male Fertility.pptVIP

内分泌干扰物的表观遗传效应与雄性生育力 摘要 环境毒素的传代效应需要生殖细胞的染色体或表观遗传变化。在性腺决定期将孕鼠暴露于农利灵（一种抗雄激素复合物）或者甲氧滴滴涕（一种类雌激素复合物），会使F1代雄性产精子（数量与活度）与生育能力下降。这种效应能够遗传给所有的后代（F1 to F4）。这种对生殖的影响与生殖细胞的甲基化模式有关。环境因子对生殖细胞的重新编程与促进可遗传疾病产生的能力对进化生物学和疾病病因学都具有十分重要的意义。 介绍 放射线，化疗和一些化合物（如环境毒素）的处理会对基因组的完整性产生影响。研究表明孕期雌性接触这些处理因素会导致后代基因或发育的缺陷。外源物质诱导的传代效应需要稳定的染色质改变或者表观遗传现象，如DNA甲基化。现在的研究认为隔代效应意味着能够多带相传，至少是到F2代。放射线通过使生殖细胞DNA突变而产生的隔代效应是最先被鉴定的，这通常与肿瘤的形成有关。化疗和环境毒素可对F1代造成影响，但是对F2代没有影响。虽然它们没有显示出隔代效应，但是内分泌干扰物的隔代效应有待讨论。 最近研究表明表观遗传改变能够使特定的基因特性隔代相传。隔代表型或基因特质需要持久的生殖细胞重编程。大鼠性别决定与睾丸发育发生在胚胎12到15天（E12 to E15），这一过程是睾丸决定因子Sry诱导塞尔托利氏细胞前体（在精子发生过程中哺育成长中的精子细胞）分化引起的。塞尔托利氏细胞前体，原始生殖细胞和迁移中肾细胞（小管肌样细胞前体）的聚集促进睾丸形态发生和索状构造形成。在性别决定期，胎儿睾丸含有内分泌干扰物靶向的甾体类受体。在索状结构形成时期雄激素受体与雌激素受体在塞尔托利氏细胞，小管肌样细胞前体和生殖细胞中表达。虽然在这个发育过程中睾丸不产生甾体类物质，但是雌激素与雄激素类物质可以影响早期睾丸细胞功能。所以甾体类物质在性别决定时期的不适当作用会使生殖细胞重新编程，进而导致可隔代遗传的基因特性与表型改变。 一 农利灵的隔代遗传效应 1 孕鼠胚胎8到15天期间短暂的甲氧滴滴涕与农利灵暴露会降低F1代精子发生能力，这与精原细胞凋亡的增加和精子数量与活度的减少有关。在胚胎15到20天进行同样的暴露对子代却没有影响。 2 实验组F0孕鼠接受了内分泌干扰物的处理。对照组F0孕鼠给予溶剂（仅注射DMSO）处理后，使用同样的方式饲养。F1，F2，F3与F4代成年雄鼠在出生后60到180天被处死，分离睾丸做组织学检验。通过检测发现农利灵处理组的F1到F4代精原细胞凋亡增加了二倍（Fig.1A）。而且，精子数最少下降了20%，精子向前运动能力下降了25%到35%(Fig. 1, B and C)。90%以上的子代都表现出精原细胞凋亡增加的缺陷。所以子代表型受影响率为90%以上，而且F1代到F4代没有差别。 3 处理组与对照组出生后60天的F1到F4代睾丸的形态没有差别。但是雄鼠在超过90天后会偶尔出现完全不孕的个体。在50个实验组F1到F4代中有4例不孕个体，所以农利灵对后代的致不孕率为8%。42例F1到F4代对照组无一例发生不孕。 4 为了鉴定这种隔代遗传效应是否通过雄性生殖细胞传递，我们进行了远缘杂交实验。农利灵F2代雄性与未处理的对照雌性杂交，然后对子代进行检测。发现雄性子代精原细胞的凋亡也上升了，而且精子数量与活度也下降了。用农利灵F2代雌性与对照雄性进行反向远缘杂交发现对子代精原细胞却没有影响。所以内分泌干扰物的隔代效应是通过雄性生殖细胞传播的。 Fig. 1 二 组织学改变 农利灵F3代的睾丸组织学检查可发现其正常生精能力的失去与生精小管的异常（Fig.2）。而对照组F3代睾丸的形态与生精能力确实正常的。 Fig. 2 三 表观遗传学机制 处理组有大于90%的子代表型产生改变，这是不能用遗传学的DNA序列突变机制来解释的。高频率遗传突变区域发生突变的频率都比这里观察的要低。而且随后的隔离会使突变表型在每代的发生率进一步降低。另外自然突变的表型是多种多样的。相比之下，表观遗传机制，包括生殖细胞的重编程，可以导致子代表型改变的高发生率。另外内分泌干扰物的暴露时期正是生殖细胞重新甲基化的时期。虽然我们不能排除新的遗传突变的发生，但是有充足的信息可以表明表观遗传机制的参与。 1 对照组与处理组出生后6天F1代雄性睾丸被取用。甲基化敏感性限制性内切酶消化后，用PCR分析DNA甲基化的改变。分析来自不同窝对照组与处理组的老鼠。发现农利灵处理组甲基化模式都很相似。处理组发现有25份PCR产物的DNA甲基化改变了。 2 用甲基化明显改变的基因引物做PCR结果显示，用RsaI 消化对照发现