多聚酶链式反应扩增DNA片段解析.pptVIP

* 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 DNA指纹法在案件侦破中有重要作用，刑侦人员通过案发现场的血液、头发等样品中提取的DNA，与犯罪嫌疑人的DNA进行比较，就由可能为案件的侦破提供证据。 讨论： 1.犯罪嫌疑人留在现场的样品一般都是极少量的，刑侦人员要怎样才能得到足够量的DNA呢？ 2.你还能说出DNA鉴定技术在其他方面的应用吗？ ★分子生物学研究中最强大的实验技术之一 ★其本质是在体外模拟细胞内DNA分子复制的过程 美国科学家　穆利斯(K.B.Mullis) 发明了PCR技术　 1993年诺贝尔奖 （一）DNA分子的结构 C、H、O、N、P 1.元素组成： 脱氧核苷酸 2.基本单位: 一、基础知识 脱氧核苷酸 脱氧核苷 磷酸 脱氧核糖 含氮碱基 嘌呤 嘧啶 腺嘌呤（A） 鸟嘌呤（G） 胞嘧啶（C） 胸腺嘧啶（T） 一个核苷酸上的磷酸基团上的“－OH”和另一个核苷酸分子的第3位碳原子上的羟基之间失去一分子水，形成磷酸二酯键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二酯键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’，5’-磷酸二酯键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端 3.脱氧核苷酸链的形成 脱氧核苷酸链结构简图 DNA分子的平面结构 A T G C A G C T 氢键 5端 3端 5端 3端 识别 ： -OH端为3′; 磷酸基团的末端为5′。 4.DNA分子的双螺旋结构 ⑴.DNA分子是由 的（即一条链为3’－5’，另一条链为5’－3’）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则 结构。 ⑵. 与 交替连结，排列在外侧，构成基本骨架； 排列在链的内侧。 ⑶.两条链上的碱基通过 连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与 配对， 一定同胞嘧啶配对。 双螺旋 两条反向平行 脱氧核糖 磷酸 碱基 氢键 胸腺嘧啶 鸟嘌呤 （1）DNA分子是由 的（即一条链为3’－5’，另一条链为5’－3’）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则 结构。 4.DNA双螺旋结构特点： （2） 与 交替连结，排列在外侧，构成基本骨架； 排列在链的内侧。 （3）两条链上的碱基通过 连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤（A）一定与 配对， 鸟嘌呤（G）一定同 配对。 两条反向平行 双螺旋 脱氧核糖 磷酸 碱基 氢键 胸腺嘧啶（T） 胞嘧啶（C） （二）DNA的复制： 1.概念： 由一个DNA形成两个完全相同的DNA的过程。 2.时期： 有丝分裂间期，减数第一次分裂前的间期。 3.场所： 细胞核（主要）、线粒体、叶绿体 4.基本条件： 酶:解旋酶、DNA聚合酶 能量:ATP 原料:四种脱氧核苷酸 模板:DNA的两条链 5.复制特点： a.边解旋边复制 b.半保留复制 6.遵循原则： 碱基互补配对原则 7.精确复制的原因 a.规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板 b.碱基互补配对保证了复制准确无误的进行 8.复制的意义: DNA分子通过复制将遗传信息从亲代传给了后代，保持了遗传信息的连续性。 引物 DNA聚合酶 4种脱氧核苷酸 DNA母链 解旋酶 在DNA复制中的作用 参与的组分 总结：细胞内DNA复制的基本体系 打开DNA双链 提供DNA复制的模板 合成子链的原料 催化合成DNA子链 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物（ RNA） 打开DNA双链 模板 合成子链的原料 催化子链合成 使DNA聚合酶能从引物3′端开始连接脱氧核苷酸 思考：体外扩增DNA时，如何提供与体内DNA复制相似条件？ 变性（ 80～100℃ ） Taq DNA聚合酶 （耐高温） 20～30个核苷酸构成DNA或RNA 二、PCR（多聚酶链式反应） （一）PCR原理 DNA双链 变性（加热80-100℃ ） 复性（缓慢冷却） DNA单链 变性的目的： 解开双链 复性的目的： 有利于引物1和引物2与两条单链的结合 PCR扩增仪 PCR扩增仪实际上就是一台能够自动调控温度的仪器，它可以根据DNA的热变性原理，通过自动改变温度，达到扩增DNA片段的目的。 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温度 （℃） 适温延伸 高温变性 低温复性 重复1～3步30轮 DNA复制的方向： DNA的合成方向总是从子链的5’端向3’端延伸 变性 →复性（退火） → 延伸 （二）PCR的反应过程：