人工细胞外基质与多种细胞共培养(80页)解读.pptVIP

组织工程研究现状 静电纺丝纳米纤维在组织工程中的应用 静电纺丝技术 纤维直径：10nm-5μm 平均孔隙率：＞85% 对材料本身和所负载物质（包括活性蛋白类物质）没有影响。 纳米纤维可用于模拟细胞外基质(ECM) 细胞在ECM上的生长很大一部分取决于支架材料的化学特征和物理特征。纳米纺丝技术可以通过调节材料的特异性基团（亲水、疏水基团、特异蛋白吸附基团）、物理特征（硬度、粘弹性、韧性）以及形成的3D-ECM结构（孔隙率、纤维排布、纤维直径等）达到仿制天然ECM结构的目的，以利于细胞的粘附、生长、迁移、分化。相对其他形式的ECM，纳米纤维ECM具有较高的孔隙率、仿真纤维蛋白结构和形貌可控性强、设备简单、投入小等特点。 纳米纤维是一种三维结构，它具有直径分布 宽、高多孔性、高比表面积，因此相比于其他结构更有利于细胞连接。 2. 有利于氧气和营养成分的补给渗透。 3. 对于生长因子和其他蛋白或药物有极好的传送性能。 4. 这种结构与人体自然的细胞外基质十分相似,适于生物响应作为组织替代品。 学界研究情况 生物材料的纺丝 据资料显示：现有的大部分用于组织工程的材料都已被电纺成丝。 各种组织所适宜的纺丝材料 平滑肌细胞在定向纳米纤维上的生长 外科手术 静电纺丝对生物活性物质影响不大 高度为13nm的岛状结构增强成纤维细胞和内皮细胞的功能，而高度为95nm的岛使细胞的功能有所减弱。 Fluorescent images of HGTFN cytoskeletons on control and test materials. M.J. Dalby et al. / Biomaterials 23 (2002) 2945–2954 细胞黏附介导生物材料 纤连蛋白和其他细胞外基质糖蛋白中的黏附结构域中含有特殊氨基酸序列，如精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸（RGD）。用RGD修饰合成材料表面可介导细胞的黏附。 成纤维细胞与材料表面接触时首先要黏附，进而铺展,其后才能进行分裂。 就细胞黏附而言，适宜的黏附力才能保证细胞的正常迁移。 Kim BS, Trends in Biotechnology,1998,16:224 28 nm 58 nm 73 nm 85 nm 58 nm, without RGD Scheme of biofunctionalized nanopattern to control integrin clustering in cell membranes: Au dots are functionalized by c(RGDfK)-thiols and areas between cell-adhesive Au dots are passivated by PEG against cell adhesion. Therefore, cell adhesion is mediated entirely via c(RGDfK) covered Au nanodots. A separation of Au/RGD dots by 73 nm causes limited cell attachment and spreading and actin stress fiber formation, because of restricted integrin clustering. This is indicated by no focal adhesion activation (FA), whereas distances between dots of 58 nm caused focal adhesion activation (FA). RGD的密度要适宜,才能使细胞既能黏附又能迁移, RGD纳米团簇结构比无规的RGD更有效地诱导细胞的黏附与迁移. 对表面氨基化后的基底进一步修饰使之连接上氧化后的葡聚糖。葡聚糖上的羟基通过过碘酸盐反应氧化生成醛基，进而共价结合上生物活性肽段：利于细胞吸附的GRGDSP，控制细胞的非特异性吸附的GRADSP，和促进神经元生长活性的IKVAV。 Stephen P. Massia,et al. Journal of Biomedical Materials Research Part A,2004,68:1 (p 177-186) 实验中采用的细胞为3T3纤维细胞，类神经元细胞PC12和类神经胶质细胞T98-G. 连接有Gly-Arg-Ala-Asp-Ser-Pro（RAD）短肽这样一个非促黏附的基团的表面和单纯连接葡聚糖的表面都不促进细胞黏附；连接有Gly-Arg-Asp-Ala-Ser-Pro (RGD)短肽的材料表面能够显著增强纤维细胞和神经胶质细胞的黏附,但神经