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植物组织培养的培养基 成分: 无机营养成分:水、无机盐 有机营养成分:维生素、氨基酸、蔗糖 琼脂:固体培养基的凝固剂 植物激素:生长素,细胞分裂素 * * * * 植物组织培养技术 1. 植物组织培养的过程: 外植体 脱分化 胚状体 愈伤组织 再分化 细胞排列疏松而无规则,是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。 植物组织培养技术 愈伤组织: 2 植物组织培养的条件: 离体、无菌、一定的营养物质、激素、适宜的外界条件 无菌操作的原因: 各种杂菌不但会和培养物争夺营养,而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质. 生长素用量比细胞分裂素含量: 比值高时:有利于根的分化,抑制芽的形成 比值低时:有利于芽的分化,抑制根的形成 比值适中时:有利于愈伤组织的形成。 融合的原生质体AB 再生壁 脱分化 愈伤组织 再分化 植物细胞的融合 植物组织培养 植物细胞A 植物细胞B 原生质体B 原生质体A 杂种细胞AB 去壁 去壁 人 工 诱 导 杂种植株 融合完成的标志 植物体细胞杂交技术 过程 植物体细胞杂交技术 将不同种的植物体细胞,在一定条件下融 合成杂种细胞,并且把杂种细胞培育成新 植物体的方法。 定义: 原理: 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。 诱导方法: 物理法:离心、振动、电刺激等 化学法:聚乙二醇等试剂 植物体细胞杂交技术 还不能完全按照人们的意愿表达亲代的优良性状。 未解决的问题: 优势:(与有性杂交方法比较) 克服远源杂交不亲和的障碍 (三)动物细胞培养的条件 1. 无菌、无毒的环境 添加一定量的抗生素,定期更换培养液。 2. 营养物质 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素以及动物或人血清等。 合成培养基:将细胞所需的各种营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基。 3. 温度和pH 温度 pH 4. 气体环境 与体内相近 36.5±0.5℃ 7.2~7.4 O2 CO2 细胞代谢所必需 维持pH CO2培养箱(95% 空气+5% CO2 ) 动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官 单个细胞 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 加培养液 胰蛋白酶 原代培养 传代培养 (分瓶前) 细胞株 遗传物质未改变 细胞系 遗传物质改变 ■细胞贴壁:在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。 ■接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖。 ■原代培养:动物组织消化后的初次培养。包括培养的第1代细胞与传了10代以内的细胞。 ■传代培养:将原代培养的细胞从培养瓶中取出,再加胰蛋白酶配制成悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养。 1、单克隆抗体的概念 由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞群,产生的化学性质单一、特异性强的抗体。 2、单克隆抗体的优点 特异性强、灵敏度高、产量大 四、单克隆抗体 * * * *
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