初级分离技术教案.pptVIP

生物分离工程 初级分离技术 总体学习目的和要求 了解蛋白质表面特性，掌握各种沉淀和泡沫分离的原理、特点以及应用范围。 目录 引言 沉淀分离 蛋白质表面特性 盐析沉淀 等电点沉淀 有机溶剂沉淀 热沉淀 其他沉淀法 沉淀生成动力学 泡沫分离 引言－学习要点 识记：初级分离概念 理解：初级分离特点 初级分离概念 初级分离特点 分离对象：体积大、杂质含量高； 分离技术：低操作成本、适于大规模生产； 分离方法：重力沉降、离心沉降、膜分离、萃取、吸附、沉淀分离及泡沫分离等 沉淀分离－学习要点 识记：盐析和盐溶概念 理解：蛋白质凝集沉淀的屏障，各种沉 淀方法的原理和影响因素 应用：采用不同的试剂方法实现蛋白质 的沉淀 沉淀的定义 沉淀与结晶的区别 沉淀生成的固体颗粒是不定形的 结晶产品为单一组分，而沉淀凝聚物则成分非常复杂（除了目标产物外，还夹杂着多种共存的杂质、盐和溶剂等） 沉淀的纯度远低于结晶 多步沉淀操作也可获得高纯度的目标产品 沉淀技术适用范围 蛋白质表面特性－蛋白质组成 胶体的定义 胶体是一种尺寸在1～100 nm以至1000 nm的分散体。它既非大块固体，又不是分子分散的液体，而是具有两相的微不均匀分散体系。 -《被遗忘了尺寸的世界》 胶体的性质 比表面增大，界面现象重要 强烈的尺寸效应 丁达尔现象 布朗运动 电泳现象 蛋白质表面特性－蛋白质性质 蛋白质的胶体性质 蛋白质的分子量约6～1000 kDa，分子直径约为1~30 nm。在此粒径范围内，蛋白质可视为胶体，并表现出胶体溶液的部分性质 蛋白质的两性电离和等电点 蛋白质两端及侧链中有一些解离基 ，解离程度受pH影响。 蛋白质的变性 物理因素：加热、加压、脱水、搅拌、振荡、紫外线照射、超声波的作用等； 化学因素：有强酸、强碱、尿素、重金属盐、SDS等。 蛋白质表面特性－沉淀屏障 蛋白质分子周围的水化层 水溶液中蛋白质可视为胶粒，其周围存在着稳定的水化层，胶粒外的这部分水客观上起排斥作用，称为“水化层斥力” 分子间的静电排斥作用 根据扩散双电层理论，胶粒是带电的，其表面吸附相反电荷的反离子，这些位于胶粒周围过量的反离子好像胶粒四周为离子氛所包围。当两个胶粒（蛋白质）趋近而使离子氛发生重叠时，处于重叠区内的反离子浓度较大，从而破坏了原有电荷的对称性，引起离子氛中电荷重新分布，即离子从浓度较大的重叠区向未重叠区扩散。这种扩散的结果就是胶粒受到斥力而相互脱离。 分子间的静电排斥作用 发酵液是一种胶体溶液，胶体粒子（发酵液中菌体或细胞）表面一般带有负电荷，由于静电引力的作用，使它周围吸附一些带相反电荷的粒子（即正电荷），于是形成双电层。双电层的负电层在质粒上不动，而正电荷受溶液热运动的影响，具有离开胶粒表面的趋势，于是双电层就分裂成两部分：吸附层（紧密层）和扩散层，它们之间的界面称为Stern界面。 在扩散层边缘有一滑动面，在面内的液体会随临近胶体的相对运动而一起移动，面外液体不随胶体运动。在不同界面会形成不同的电位。胶体表面电位为φs，Stern平面上电位为φd，滑动面上电位为ξ（能实际测得，所以它是表征双电层特性的重要参数）。ξ电位越大，胶粒间电排斥作用就越强，胶粒的分散程度也越大。 ξ电位与扩散层厚度和电动电荷密度（滑动面上电荷密度）成正比，而扩散层厚度又与溶液性质（电解质的种类，浓度，pH值等）有关，例如，对带负电性菌体的发酵液，高价阳离子的存在，可压缩扩散层的厚度，促使ξ电位迅速降低，而且化合价越高，这种影响越大。当双电层的排斥力不足以抗衡胶粒间的范德华力时，由于热运动的结果导致胶粒的互相碰撞而聚集起来。 所以，要实现蛋白质沉淀，可以采用降低蛋白质周围水化层和双电层厚度的方法来降低蛋白质溶液的稳定性。而水化层厚度及ζ电位与溶液性质（电解质种类，浓度计pH值等）密切相关，所以，蛋白质的沉淀可采用恒温条件下添加各种不同试剂的方法实现。 蛋白质表面特性－沉淀策略及方法 策略 破坏蛋白质四周水化层 降低双电层厚度 沉淀方法 改变溶液pH值 加入无机盐或改变无机盐种类 加入水溶性有机溶剂 添加脱水剂 蛋白质表面特性－常用的沉淀技术 盐析沉淀 等电点沉淀 有机溶剂沉淀 聚合物沉淀 热沉淀 盐析沉淀-学习要点 识记：盐析和盐溶概念 理解：盐析沉淀的原理，影响盐析的各种因素 应用：掌握盐析操作过程 盐析沉淀-盐析的定义 定义 蛋白质在高离子强度的溶液中溶解度降低、发生沉淀的现象称为盐析（Salting-out） 溶解度与I的关