发酵工艺学菌种选育解析：.pptVIP

第二章　菌种选育、保藏与 复壮  菌种选育是一门应用科学技术。 理论基础:微生物学、微生物遗传学、生物化学、分子生物学、基因工程等学科。 目的: ？ 菌种选育的基本内容: 根据菌种自然变异而进行的自然选育。 用人工方法引起菌种变异或形成新的杂种, 再按照工业生产的要求进行筛选来获的新的变种或杂种。 包括诱变育种、杂交育种、原生质体融合、基因工程技术育种。 菌种的选育包括选种和育种两方面的内容 选种：是根据微生物的特性，采用各种分离筛选 方法,从自然界中或从生产实践中选出适合人们要 求的菌种。 如：从噬菌体的发酵液中筛选抗噬菌体菌株 育种：是根据微生物遗传变异的原理，在已有的菌种基础上，采用诱变或杂交的方法，迫使菌种发生变异，然后在变异的菌株中挑选出符合生产实际要求的菌种。 （二）遗传变异的物质基础 （1）研究历史 1866年 孟德尔—分离定律和自由组合定律 1897年 Miescher—发现核酸，但是没有发现其重要意义。 1910年 J.H.Morgan—基因存在于细胞核和染色体里。 （2）遗传物质的分子结构和化学组成 遗传物质的化学组成—遗传物质核酸是以核苷酸为基本单位的高分子化合物。 遗传物质的结构—DNA双螺旋结构 DNA复制—半保留复制 DNA双螺旋结构 §1 自然选育 概念：利用微生物在一定条件下产生自发突变的原理，通过分离，筛选排除衰退型菌株，选择维持原有生产水平的菌株的纯种选育的方法。 1.1菌种退化和变异的原因 总的来说：内因＋外因 遗传基因型的分离 要点：遗传物质的多样化，群体繁殖 2. 自发突变的结果 可能原因： 1）沙土管长期保藏 2)连续传代 3）新陈代谢产生的诱变物质 4）增变基因、死亡基因的存在 3. 经诱变剂处理后的退化变异。 优点：简单易行 缺点：效率低、进展慢 难以获得高产突变株 　　　以微生物的自然变异作为基础的生产选种机率并不很高，一个基因的自然突变频率仅10-6-10-10左右。 目的：纯化、复壮菌种 在下列情况下首先应考虑用自然选育的方法减缓菌种的变异和退化 进行菌种长期保存前，需进行自然分离，使菌种尽可能纯化； 通过人工诱变等选育到高产的优良菌种时，要及时进行自然分离，淘汰已发生回复突变的不良菌株，使稳定的高产菌株从中分离出来； 自然分离是用其他方法进行菌种选育时不可缺少的部分，只有配合使用自然分离，才能真正得到稳定的高产菌株。 1.3 自然选育的方法 通过表现形态来淘汰不良菌株 通过目的代谢产量的考察 通过遗传基因型纯度的试验 传代的稳定性试验 §2 诱变育种 2.1概念：是指人为地、有意识地将对象生物置于诱变因子中，使该生物体发生突变，从这些突变体中筛选具有优良性状的突变株的过程。此法可加快菌种选育的速度，大大提高获得优良菌株的机率。 2.2优点：速度快、收效大、方法简单 是当前的一种主要方法 2.3理论基础： 基因突变(诱发突变) 诱发突变 重要概念 突变：由于染色体或基因本身的变化而产生遗传性状的变异。 自然突变：在自然的状况下，发生的突变。 诱发突变：在人为地用物理或化学因素诱发的突变。 诱变剂：可以提高突变频率的物理或化学因素。 诱变机理 2.3.1 诱变剂的种类 ①物理诱变剂 射线如紫外线、X-射线、γ-射线，快中子 ②化学诱变剂 碱基类似物、5-氟尿嘧啶、烷化剂、亚硝基胍和甲基磺酸乙酯等。 化学诱变剂，比物理诱变剂电离辐射有效，而且很经济，但大部分诱变剂是致癌剂，危害性大。 物理诱变剂 　　紫外线、X-射线、 γ-射线、 快中子 　　特点：紫外线方便、有效、使用安全，其他的几种射线有一定的穿透力 化学诱变剂 　　碱基类似物、吖啶类、烷化剂 　　特点：高效、经济、但应注意使用安全 2.3.2 诱变处理的基本方法 A.诱变剂的选择 　　不稳定菌株－－－－温和诱变剂 稳定菌株－－－－强烈的、广谱的诱变剂 低剂量诱变剂有利于高产菌株的稳定性 B.诱变剂剂量的选择 ①剂量的表示方法：常用杀菌率表示诱变剂的剂量。 杀菌率 =（ m―n）/m ×100％ m：未被处理菌体长出的菌落数 n：被处理菌体长出的菌落数 突变株的筛选（Selection） 随机筛选 (Random selection) 摇瓶筛选法 初筛一