分解纤维素的微生物的分离(省优质课竞赛用)解析：.pptVIP

纤维素生物燃料：最有希望替代石油能源 微生物培养基的氨基酸氮源，由酪蛋白水解得到，常见商品名称为水解酪素或酶解酪素。酪蛋白水解后富含21种氨基酸，氨基酸种类齐全。因此常用于制备培养基。 【酪素】 * * 第二代生物燃料主要以纤维素质材料为原料，如富含纤维素、生长迅速的草本植物。 可转化为草油的原料有很多，从木材废料（锯木屑 、木质建筑残片）到农业废弃物 （玉米秸秆、小麦茎秆），再到“能源作物”。 这些原料作物耕作成本低（与每桶石油有等价能效的草油为10到40美元）、量大，具备与60美元/桶的原油竞价的能力。 更关键的是，这些作物的种植生产不会干扰和危及粮食生产。 纤维素： 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物； 纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨；分布植物的根、茎、叶中； 分解纤维素的微生物的分离 JLSSY BYH 能分解纤维素的微生物，有各种细菌、真菌和少数放线菌。 纤维素 纤维素酶 组成 分布 作用 C1酶、CX酶 葡萄糖苷酶 纤维二糖 葡萄糖 纤维素 由葡萄糖相连而成的高分子化合物 由C1酶、CX酶和 葡萄糖苷酶组成的复合酶 植物的根、茎、叶等器官，木材、作物秸秆等 某些微生物 与果胶构成植物的细胞壁，用于纺织业、造纸业，食品中的膳食纤维具有通便清扫的作用 纤维素酶能水解纤维素， 一.了解纤维素和纤维素酶 下列生物能分解纤维素的是（ ） ①人 ②兔 ③牛 ④蘑菇 ⑤纤维杆菌 A.①②③④⑤ B.②③⑤ C.②③④⑤ D.③⑤ C ①取二支20mL的试管 小实验：纤维素酶分解纤维素的实验 ②各加入一张滤纸条 ③分别加入pH4.8，物质量为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml 甲 乙 ④在乙试管中加入1mL纤维素酶 ⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在 140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：乙试管的滤纸条消失 讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的 作用是什么？ 本实验的自变量是纤维素酶的有无 自变量的操纵方法是：在一支试管中添加适量（1mL）的纤维素酶溶液，在另一支试管不添加纤维素酶，但需加入等量的缓冲液，不能加入蒸馏水，否则会影响溶液的pH。 实验分析：P27的小实验中的自变量是什么？ 二.纤维素分解菌的筛选 1.纤维素分解菌的筛选方法 2.纤维素分解菌的筛选方法的原理 刚果红染色法：这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选 。 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 1、实验流程图： 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布在鉴别纤 维素分解菌的培养基上 筛选产生透 明圈的菌落 三.实验操作 ①分布环境 富含纤维素的环境中 2、注意事项 生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的菌的几率要高于普通环境。 ②原因 【资料一】土壤取样 ③实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。 ④讨论:如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的腐殖土壤中。 【资料二】选择培养 1、选择培养的目的： 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物 2、制备选择培养基： 培养基成分分析 水 溶解后，蒸馏水定容至1000mL 氮素、生长因子 水解酵素 0.5g 生长因子、氮源、碳源（极少） 酵母膏 0.5g 无机盐 KCl 0.5g Na2HPO4·7H2O 1.2g KH2PO4 0.9g MgSO4 ·7H2O 0.5g 氮源、无机盐 NaNO3 1g 碳源（能源） 纤维素粉 5g 提供主要的营养物质 培养基组成 课本问题： ①右边的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ ②这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ ③你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 液体培养基，原因是配方中无凝固剂 有选择作用，本配方中的碳源是纤维素（粉），所以能分解纤维素的 微生物可以大量繁殖 自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤维素改为葡萄糖。 按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释101～107倍。 101 102 103 104 105 106 【资料三】梯度稀释 1、