分子发光法解析：.pptVIP

第五章 分子发光分析法Molecular Luminescence 一、 概述 分子荧光分析法是根据物质的分子荧光光谱进行定性，以荧光强度进行定量的一种分析方法 荧光分析法的特点： 1.与紫外-可见分光度法比较，荧光分析法具有更高的灵敏度 2.选择性好 荧光法既能依据发射光谱，又能依据吸收光谱来鉴定物质 3.所需试样量少、操作方法简便 4.能提供较的多分析参数、信息量大 荧光分析法的缺点：应用范围不够广泛 M=2S+1 S为电子自旋量子数的代数和(0或1) 平行自旋比成对自旋稳定(洪特规则)，三重态能级比相应单重态能级低 大多数有机分子的基态处于单重态 （2）分子能级跃迁 基态(S0)→激发态(S1、S2、激发态振动能级)： 吸收特定频率的辐射；量子化；跃迁一次到位 激发态→基态： 多种途径和方式(见能级图) 速度最快、激发态寿命最短的途径占优势 激发态→基态的跃迁 荧光物质必须含有强吸光基团 (a) 跃迁类型：?*→?的荧光效率高，系间跨越过程的速率常数小， 有利于荧光的产生 (b) 共轭效应：提高共轭度有利于增加荧光效率并产生红移 荧光物质必须具有刚性平面结构 （3)荧光螯合物 不少有机化合物虽然具有共轭双键，但由于不是刚性结构，分子处于非同一平面，因而不发生荧光。若这些化合物和金属离子形成螯合物，随着分子的刚性增强，平面结构的增大，常会发生荧光 如8-羟基喹啉本身有很弱的荧光，但其金属螯合物具有很强的荧光 根据荧光量子产率的定义，荧光强度 If 等于吸收的光量 Ia与荧光量子产率?的乘积： If = ? Ia 经常遇到的自淬灭现象有两种： （1）当荧光物质发出的荧光通过溶液时被荧光物质的基态分子所吸收，即自吸收现象。 （2）由于激发态分子之间的碰撞，导致非辐射跃迁概率增大，荧光效率降低。 荧光发射光谱的普遍特性： （1）Stokes位移 在溶液中，分子荧光的发射相对于吸收位移到较长的波长，称为Stokes位移。这是由于受激分子通过振动弛豫而失去转动能，也由于溶液中溶剂分子与受激分子的碰撞，也会有能量的损失 （2）荧光发射光谱的形状与激发波长无关 因为分子吸收了不同能量的光子可以由基态激发到几个不同的电子激发态，而具有几个吸收带。由于较高激发态通过内转换及转动弛豫回到第一电子激发态的几率较高，远大于由高能激发态直接发射光子的速度，故在荧光发射时，不论用哪一个波长的光辐射激发，电子都从第一电子激发态的最低振动能层返回到基态的各个振动能层，所以荧光发射光谱与激发波长无关 三、荧光分析仪器 常用于测量荧光的仪器以下五个部件构成：激发光源、样品池、用于选择激发光波长和荧光波长的单色器以及检测器 2. 温度对磷光强度的影响：随着温度的降低，磷光逐渐增强 3.重原子效应：重原子的高核电荷使磷光分子的电子能级交错，容易引起或增强磷光分子的自旋轨道偶合作用，从而使S1→ T1的体系间窜跃概率增大，有利于增大磷光效率。 4.室温磷光 1．样品池 盛试液的石英液槽需放置在盛液氮的石英杜瓦瓶内 2．磷光镜 利用磷光镜不仅可分别测出荧光和磷光强度，而且可以测出不同寿命的磷光 第三节 化学发光与生物发光分析 一 、概述 化学发光指由化学反应能，激发物质分子所产生的光辐射。生物发 光指生物体系中的化学发光。 优点：灵敏度高、仪器简单、线性范围宽、分析速度快。 缺点：能用于化学发光与生物发光分析的试剂相对有限，对发光机理的研究较少。 生物发光具有很高的发光效率。常用的化学发光效率较低，一般在0.01以下。 植物 Pyrocystis fusiformis 1. 化学发光反应的条件： （1）化学反应必须能放出足够的能量； （2）化学反应所释放的能量能够用于产生激发态分子； （ 3）处于激发态的分子以辐射跃迁的形式返回基态。 3. 化学发光反应的类型 （1） 液相化学发光 四、化学发光分析的应用 五、 生物发光分析法 在生物发光分析中，通常同时涉及到酶促反应和发光反应。这类发光分析法不仅灵敏度高，选择性也很高。例如三磷酸腺苷（ATP）的测定，就是生物发光分析的成功实例。在