分子荧光法解析：.pptVIP

食品检测方面应用 （1） 食品中矿物质及金属元素的分析 （2） 食品中氨基酸、维生素等的分析 （3） 食品霉变物质、菌类污染荧光分析 （4） 食品添加剂、防腐剂、食品包装有 害物质分析 （5） 食品农药残留、药物残留分析 荧光分析法教学要求 掌握分子荧光、磷光的产生机理；掌握激发光谱和发射光谱特征。 掌握荧光与分子结构的关系以及溶液对荧光强度影响的因素。 了解荧光分析法的特点及定量测定方法。 了解荧光分析仪器的结构。 The End 温州大学化材学院 微纳结构材料 物理化学研究所 取代基的影响 给电子取代基 增强荧光 —NH2, —NHR, —NR2, —OH, —OR, 等 ?EM 285-365 nm 270-310 nm 310-405 nm 相对荧光强度 1.8 1.0 2.0 吸电子取代基 n 电子不与 ? 电子共轭 羰基类 1）n??* 跃迁禁阻，?小，10-2 2）最低单重态为 n, ?* 型，易于ISC。荧光弱，磷光强 非荧光 强荧光 取代基的位置 1） 有利于电子离域的，则荧光增强。 因此，一般邻位、对位给电子基团导致荧光增强。 2）有利于形成环，导致分子刚性增大，荧光增强。 荧光强度较弱 荧光强度较强 重原子效应 重原子降低荧光但增强磷光 如苯环被卤素取代，从氟苯到碘苯，荧光逐渐减弱到消失，该现象也称重原子效应。 ?F 0.22 10-5 ?P 0.14 0.43 ?P 1.9 s 0.024 s 重原子效应 不含有杂原子（N,O,S）的有机化合物均属于这一类，其特点是自旋允许跃迁，?大，?104，荧光强 ?, ?* 1) 含有杂原子（N,O,S）的有机化合物多属于这一类，含有n 电子，其特点是自旋禁阻 ，? 小，?102, ISC速率大，荧光弱。 2) n 轨道的能量受环境的影响大，如质子化或生成氢键等，将使n 轨道的能量降低，导致n??*跃迁的能量增大。荧光分子的最低激发态可能变成?,?*。 分为两类 含氮杂环有机物 含羰基杂原子有机物 n, ?* 最低单重态的性质 含氮杂环有机物 荧光随溶剂极性的增大而增强 例1 喹啉 介质 苯 乙醇 水 相对荧光 1 30 1000 可以理解为N上的孤对电子与水形成氢键，使n轨道能量降低，从而使最低单重激发态由n, ?*变成?, ?*。 含羰基有机物 芳香类 S1与T1能级间隙小， ISC效率高，接近于1。 脂肪类 有微弱的荧光，ISC效率低一些 影响荧光的外界因素 （一）溶剂效应： ? 溶剂极性可增加或降低荧光强度 （改变?—?*及n—?* 跃迁的能量）； ? 与溶剂作用从而改变荧光物质结构来增加或降低荧光强度。 影响荧光的外界因素 （二）温度： 温度增加，荧光强度下降（因为内、外转换增加、粘度或“刚性”降低）。因此体系降低温度可增加荧光分析灵敏度。 影响荧光的外界因素 （三）pH值： 具酸或碱性基团的有机物质，在不同pH值时，其结构可能发生变化，因而荧光强度将发生改变；对无机荧光物质，因pH值会影响其稳定性，因而也可使其荧光强度发生改变。 pH 2 pH 13 pH7~12 影响荧光的外界因素 （四）内滤光和自吸： 体系内存在可以吸收荧光的物质，或荧光物质的荧光短波长与激发光长波长有重叠，均可使荧光强度下降，称为内滤光；当荧光物质浓度较大时，可吸收自身的荧光发射称为荧光自吸。 荧光猝灭 （1）碰撞熄灭 荧 光 猝（熄） 灭：荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起荧光强度降低或消失的现象。 荧光猝（熄）灭剂：能引起荧光猝灭的物质称为荧光熄灭剂。 相对速率 1 K1 [M*] K2 [M*] [Q] 与分子的直径、粘度、温度等因素有关。 激发 发射 熄灭 （2） 能量转移熄灭 再吸收过程： 共振能量转移： 分子内能量转移： hv 荧光猝灭 （3） 氧的熄灭作用 氧分子是荧光、磷光的熄灭剂， 没有除氧，溶液中难以观察到磷