研究生现代微生物学微生物(实验)技术分析报告.ppt

第二章 微生物（实验）技术概论 1. 灭菌技术 灭菌、消毒、除菌与操作，尤其强调无菌操作在微生物学研究中的重要意义。 2. 微生物采集和分离技术 微生物样品采集、富集和微生物纯培养的分离 菌种分离方法，培养基设计制备与大规模细胞培养、菌 体收集与菌种保藏 4. 微生物育种方法： 标记菌种获得与应用， 体外诱变育种、杂交育种、原生质育种、基因工程育种 离心、电泳原理和方法，层析技术，紫外、红外、质谱 、核磁共振原理及微生物研究中的应用 第一节 灭菌、除菌和消毒技术 灭菌、消毒、除菌与操作，尤其强调无菌操作在微生物学研究中的重要意义。 无菌技术是指在操作过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。 盖伦坚持化脓是伤口恢复所必须过程的观点，并且由于他在医学界的统治地位，在很大程度上影响了后来的医生对伤口处理的探索。直到近代微生物学的奠基人、法国杰出的生物学家化学家路易斯-巴斯德(Louis Pasteur)于19世纪50年代证明伤口的脓汁是由于空气中存在的微生物导致的，盖伦对感染的错误认识才被彻底纠正。巴斯德同时还提出，如果是微生物引起了感染，那么可以通过去除这些微生物来控制感染，而去除微生物的方法有：过滤、加热、将它们暴露于化学环境中。前两种方法显然是不适合应用于人类的，与巴斯德同一时代的他的朋友、苏格兰的外科教授约瑟·李斯特(Joseph Lister)于是选择了第3种方法来控制伤口的感染。 1865年，当时Lister发现受伤感染是由细菌引起的。李斯特了解到石碳酸可以被用来清除污水发出的臭味，如果使用石碳酸的话则可能降低疾病的传染性。于是决定试着利用它治疗1例小男孩腿部的复合骨折，并获得成功。 此后，从事外科手术的医生逐渐从身穿便衣更换为消毒衣和帽子，消毒衣逐步地引入了手术台，并且开始对手术台进行消毒，这就有效地降低了病人感染的几率。发展到橡胶手套、用热力灭菌来消毒器械，推动了无菌技术的发展。1897年，波兰医生米库利奇提出：在为病人施行手术过程中外科医生应该将自己的口腔、鼻腔、胡须用一层纱布遮住以避免唾液飞溅到伤口上，于是口罩便逐步形成了，它进一步促进了无菌技术的发展。 但是由于手术室内大多处于封闭的状态，内部的空气很难流通，这也就造成了感染的几率依然是很大的，直到后来的20世纪40年代引入了空气过滤系统，病人的感染几率才得到了有效控制，从过去的10%下降至1%，这不得不说是一个伟大的改变。也正因为此，人们从此意识到了无菌技术的重要性，而隔离技术也正式地被运用开来。 现代消毒灭菌的方法很多，为有效实施无菌技术操作打下了坚实基础。在日常运用时，要注意将消毒、灭菌、无菌和清洁几个词的概念区别清楚。 消毒，即用物理的或化学的方法，杀死和清除传播物体上病原微生物，达到无害化的目的，即要求将有害微生物的数量减少到无害的程度而非全部杀灭。 灭菌，是将传播物体上的一切微生物全部杀灭。 无菌，是使传播物体不存在任何微生物的状态，是在灭菌和消毒的基础上才能实现。 清洁，是将污染物体上的微生物的数量降低到安全水平以内的一种方法，比如清洗及洗刷等，它达不到消毒的要求。 1、现代消毒灭菌的方法 可分为两大类：即物理消毒法和化学消毒法。 物理消毒法包括： ①下排式高压灭菌消毒法。②预真空高压灭菌法。③低温甲醛蒸气消毒器灭菌法。④煮沸消毒灭菌法。⑤三氧消毒法。⑥干热灭菌法。⑦其它， 如光照消毒，γ射线(两种射线)灭菌等。 3M压力灭菌指示胶带------型号3M-1222：用于各种下排气，预真空锅，指示灭菌包是否灭菌，并判读包外灭菌效果。胶带上有指示剂，只有在一定温度压力的饱和蒸汽作用下， 经一定时间后，才能变成深褐色。胶带不会因蒸汽而自行脱落，不留残胶。圆珠笔及标记笔，在胶带上可作相关记录。可用于封包，保证灭菌包裹既不紧也不松。 化学消毒法包括： ①过氧乙酸(PAA)消毒。②甲醛消毒。③环氧乙烷消毒。④戊二醛消毒。⑤84消毒液消毒。⑥乙醇消毒。⑦碘消毒。⑧高猛酸钾消毒。⑨洗必太消毒等。