7-细胞分裂和细胞周期10.ppt

等密度离心分离（density?gradient?centrifugation） 主要是根据被分离样品的密度。用介质（蔗糖，甘油，或氯化铯(CsCl)）产生一种密度梯度，通过离心使不同密度的颗粒悬浮到相应的介质密度区。 因此用这种方法分离颗粒，主要是根据被分离颗粒的密度差异。只要被分离颗粒间的密度差异大于1% 就可用此法分离。 细胞培养 ? （一）动物细胞培养 成纤维细胞 上皮型细胞 植物组织培养, 细胞的全能性 光合磷酸化的三种方式及差别？ C3植物和C4植物的差别？ * * * * * 减数分裂中期染色体的自由组合 两对同源染色体 染色体组合数 Number of combinations: 2n e.g. 2 chromosomes in haploid 2n = 4; n = 2 2n = 22 = 4 possible combinations In humans e.g. 23 chromosomes in haploid 2n = 46; n = 23 2n = 223 = ~ 8 million possible combinations! 随机受精 卵细胞 800万种可能染色体组合数 精子 800万种可能染色体组合数 合子 64x1012 种可能染色体组合数中 的一种 减数分裂前期I交换 Crossing over 交叉（Chiasmata） – 在联会处发生交换，非姊妹染色体的遗传物质发生交换 交换产生重组的染色体 后代变异 交叉与交换 在减数分裂前期I(粗线期)非姊妹染色体间可能发生交换，细胞学上发生交叉，导致遗传物质的重组，导致遗传的多样性。 3.5细胞生物学研究方法 显微镜与细胞形态结构观察 （1）显微成像技术 300多年前 Leeuwenhoek 世界上最早的显微镜 Robert Hooke 软木　蜂窝状的小格子“细胞” 1838年　Schleiden 1839年　Schwann 细胞是组成生物体的基本单位 构成： ①照明系统 ②光学放大系统 ③机械装置 原理：经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。 普通光学显微镜 光学显微镜 显微镜的分辨率 d 显微镜的最大分辨率：分辨两个质点间的最小距离 λ光的波长 n 介质折射率 空气 1，香柏油 1.515 ? 光由物镜进入样品夹角的一半，镜口角 样品 像 物镜 ? NA 物镜的数值孔径  可见光波长 400－700 nm 紫外波长 200－300nm 电子束的波长 100KV电镜 0.004nm 光学显微镜的最大分辨率 例、光学显微镜 玻璃物镜的镜口角是70o 蓝光（450nm)空气中， 最大分辨率是多少？ NA=1xSin70=0.94 d=0.61x450/0.94=292nm~0.3?m 显微镜的放大倍数 放大倍数＝物镜放大倍数x目镜放大倍数 透射电子显微镜 电子显微镜 透射电镜Transmission Electron Microscope， TEM 真空系统 电子枪 发射电子，加速电子 电磁透镜 照相系统 扫描电子显微镜 Scanning Electron Microscope， SEM 荧光显微镜 荧光物质： 某些物质在特定波长范围内的光线照射下，可发出波长比照射光波长长的光线 — 荧光。受激发后能产生荧光的物质称荧光物质或荧光素 激发光(EXCITATION)： 能特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的光线称为该荧光素的激发光。激发/吸收光谱；吸收波峰(最大吸收波长) 发射光(EMISSION): 发射光谱；发射波峰(最大发射波长) 488nm 520nm 异硫氰酸荧光素(FITC) 波长 激发波长 荧光波长 荧光的性质 吸收光 保持固有的荧光特性 荧光波长＞激发波长 荧光强度小于激发光的强度 有不同程度的衰减 荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率 荧光显微镜 Fluorescence microscope DAPI+FITC FITC+PI 共聚焦激光扫描显微镜（CLSM） 荧光显微镜及数码成像采集系统 细胞组分与结构的分离 2、 离心分离技术 用细胞破碎技术和超离心技术对细胞器或细胞结构成分进行分离和进一步的生物化学分析是探索细胞结构与功能相互关系的重要途径。 离心分离技术 组织匀浆在等渗匀浆介质中进行差速离心， 匀浆颗粒在一个固定离心力的作用下的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同