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- 2016-04-13 发布于重庆
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1氨基酸的分离鉴定纸层析法MicrosoftWord文档
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
实验目的:1、学习纸层析法的基本原理;
2、掌握纸层析法分离氨基酸的操作技术。
实验原理:
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的分配系数不同而得以分离的一种方法。
惰性支持物是新华一号滤纸,其上含有很多的羟基,与水有较强的亲和力因此把它看成是含有静止水相的惰性支持物。水相因此称为静止相(固定相),有机溶剂称为流动相。
展层溶剂由两个互不相溶的有机溶剂和水组成,它们互相混合时便分成两相:一相是以水饱和了的有机相,另一相是以有机溶剂饱和了的水相。
分配系数(α)=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
当用滤纸进行分配层析时,流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提,使氨基酸在两相之间不断分配而得以分离。
分配层析的原理可用一个模式解释(英国Martin等):把滤纸看成是一个层析柱,可以分成若干层板,设层板的物质为A、B;且A和B的分配系数(α)分别为1和1/3;又设固定相为S,流动相为L,两相互相接触但不相混溶。
当第一层流动相中加入一定量的A、B两项物质后,溶质根据各自的分配系数在第一层的两相中分配,流动相继续在流动,此时第一层固定相与新流到的流动相之间以及原来第一层流动相与第二层固定相之间进行第二次分配,以此类推三次分配即可看出A与B最浓部分以分开,A在第二层最浓,B在第三层最浓,如
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