紫杉醇的提取制备分析报告.pptVIP

具体介绍 紫杉醇（paclitaxel，商品名Taxol）是从红豆杉属（Taxus spp）植物中分离得到的一种具有独特抗癌作用的二萜类化合物。 分子式为C47H51NO14，分子量为853.89，外观为白色针状结晶，熔点为213~216 ℃ ，比旋度为[α]D20-49（MeOH），结构式如图。 溶解性：可溶于甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷，三氯甲烷等有机溶剂，难溶于水（在水中溶解度仅为0.006mg/ml），不溶于石油醚。与糖结合成苷后的水溶性大大提高，但在脂溶性溶剂中溶解性降低。 酸碱性：紫杉醇分子结构中虽然含有氮取代基，但氮原子处于酰胺状态，且邻近连有苯基、羟基、酯基等吸电子基，不显碱性，故紫杉醇为中性化合物。 化学性质：紫杉醇在PH4-8范围内比较稳定，碱性条件很快分解，对酸相对稳定；紫杉醇在甲醇钠溶液中发生剧烈反应，可与MnO2试剂发生反应，且不易还原。 紫杉醇是一种分子量很大，结构很复杂的化学物质。 目前，紫杉醇的来源主要有以下几种：(1)天然红豆杉植物提取;（2）人工栽培;(3）半合成；（4）全合成；（5）生物合成；（6）真菌发酵；（7）植物组织细胞培养。但更多的还是从天然和栽培红豆杉的树皮或枝叶中直接提取得到。 其提取物中含有大量的植物腊、色素和树胶等杂质，特别是其中共存许多分子结构和理化性质与紫杉醇极其相近的紫杉烷系列化合物，给分离工作带来很大的困难。 研究表明，紫杉醇有明显的抗肿瘤作用。对人体肿瘤MX-1乳腺癌、CX-1结肠癌、LX-1肺癌异种移植均有明显的抑制作用。临床上主要用于卵巢癌、也用于肺癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌等。 提取制备方法 提取纯化工艺 紫杉醇的HPLC 检测 色谱条件：流动相为甲醇：水=65∶35，进样量10 μL，流量为1.0 mL／min，检测波长为227 nm 检测。标准曲线绘制：用甲醇配制浓度为 0.1 mg／mL 的紫杉醇标准品溶液，分别以10、12、14、16、18、20 μL 的进样量进行HPLC分析并绘制标准曲线。 实验结果 由60g红豆杉枝叶粉末最后获得紫杉醇69.64 μg，纯度93%。由于在本实验中选取试剂均以无毒、廉价为原则，所以在环境、经济性上有一定的优势，可以为工业放大提供参考。 分析与讨论 溶剂对紫杉醇提取率的影响 不同种类的溶剂对红豆杉紫杉醇醇类化合物的萃取效果不同。 本实验采用了几种溶剂进行提取，所得结果见右表。 确定采用乙酸乙酯/丙酮为提取溶剂。 提取方法对紫杉醇提取的影响 实验采用普通浸提法与索式提取法进行比较，两种提取方法使用相同量的乙酸乙酯/丙酮提取相同质量的红豆杉叶粉末。结果见表。 紫杉醇浸膏的固液萃取纯化 本实验采用了石油醚（60~90℃）对浸膏进行固液萃取，结果如图所示。 紫杉醇浸膏的液-液萃取纯化 用 10 倍体积（mL/g）乙酸乙酯溶解适量浸膏；加入等体积1mol/L 的NaOH 溶液，搅拌10~20 min；静置分相后，有机相用1/2 倍NaOH。溶液体积的蒸馏水洗涤 2 次。由于第二次洗涤常伴有乳化现象，所以在第二次洗涤中改用浓度为0.5 mol/L 的盐水洗涤，洗涤后有机相用无水硫酸钠进行脱水，旋转蒸发浓缩至25%~30%的有机相体积。 紫杉醇浸膏的己烷沉淀 紫杉醇有在正己烷中沉淀这一特性，所以向上述得到的紫杉醇乙酸乙酯溶液中加入不同体积的正己烷溶剂，将紫杉醇沉淀下来，沉淀效果如图所示。 紫杉醇硅胶柱层析纯化 由于己烷沉淀法得到的样品中仍含有较多杂质，本试验采用了分段梯度操作. 洗脱中以正己烷/丙酮作为流动相。 取1 g浸膏溶于5 mL 丙酮，加样于含15 g硅胶的层析柱，用正己烷/丙酮（体积比为8∶2）洗脱，每5 mL 收集流份，不断减少流动相中正己烷的含量，最终以正己烷/丙酮（体积比为5∶5）结束. 对所有收集液进行毛细管薄层点样后，发现在体积比为7∶3 这个浓度之前杂质很多。 紫杉醇的结晶 紫杉醇结晶体系以甲醇和水（3∶1）体系较佳. 将层析后含紫杉醇的组分减压浓缩后，按8 mL/g 的比例溶解在甲醇中，水浴加热到50℃，同时在搅拌的情况下缓缓滴入1/3 甲醇体积的双蒸水，4℃冷却放置48 h 以上即可得呈白色发黄的紫杉醇针状晶体。 TLC 薄层板检测 将结晶产物 4℃低温离心后弃上清，沉淀溶解在甲醇中进行薄层板点样检测。展开剂：氯仿/甲醇（体积比为12∶1）；显色剂：茴香醛/硫酸/乙醇（体积比为1∶3∶50）放置干燥箱内100℃烘干，10 min 或直接在紫外检测器下观察。紫