09(核酸生物学功能-1).pptVIP

冈崎片段引物的切除、缺口的填补和切口的连接 随后链 DNA 复制时，合成的子链双链中有一条来源于母链，而且两条子链其中一条子链的合成是不连续的， 而另一条链的合成是连续的，所以 DNA 的复制为半保留半不连续复制。 半保留半不连续复制 复制具有终止（termination）位置。 在大肠杆菌里，由于基因组是一环型 DNA，两个复制叉向前推移，最后在终止区相遇并停止复制。 3.复制的终止 大肠杆菌DNA复制的终止 复制原点 复制叉 复制中的 DNA （四）DNA损伤与修复 1.DNA 的损伤 2.损伤修复系统 1.DNA的损伤 某些化学、物理的因素可引起细胞 DNA 的损伤（化学结构发生改变）。 化学因素 种类繁多，机制也很复杂； 物理因素 紫外线的作用机制研究得比 较清楚，例如形成胸腺嘧啶二聚体。 此外，DNA 的损伤还有碱基可能改变或 丢失、骨架中的磷酸二酯键可能断裂，螺 旋链可能形成交联等。 紫外线引起 DNA 分子中同一条链上相邻的两个嘧啶核苷酸以共价键连接生成环丁烷结构，即嘧啶二聚体。最易见的是胸腺嘧啶二聚体。此种二聚体不能容纳在双螺旋结构中，不能形成氢键配对，影响 DNA 的复制和表达。 胸腺嘧啶二聚体 2.损伤修复系统 不论物理因素或化学因素所造成的损伤，只要 DNA 结构发生改变，就能被修复酶识别，而把不正常的部分切除。修复对保护 DNA 的正常功能是非常重要的。 修复作用 包括光诱导的修复（光修复）和不依赖光的修复（暗修复）。 在高等动物体内，暗修复代替了光修复。 光修复也称光复活，它是由可见光（300nm～400nm）激活光复活酶，该酶能分解胸腺嘧啶二聚体。 已从细菌和一些动物的细胞中分离出一种光复活酶。此酶以一种尚未了解的方式吸收光，并利用光能裂解二聚体中的环丁烷基的C-C键，以达到复活胸腺嘧啶。哺乳动物和人体内缺乏此酶。 （1）光修复 暗修复通过 3 种不同的机理来完成修复： ① 切除修复（excison repair） ② 重组修复（recombinational repair） ③ SOS修复（SOS repair） （2）暗修复 ① 切 除 修 复 ② 重组修复 重组修复是一种复制后修复。 重组修复的结果是亲代链上的嘧啶二聚体并未消除，但这一条 DNA 链却逐渐被稀释，最后对正常生理过程没有影响，损伤也就得到了修复。 这种修复是允许子链 DNA 复制合成时越过亲链上受损伤的片段而不形成缺口，这种修复以牺牲复制的忠实性为代价。 ③ SOS修复 （五）以RNA为模板合成DNA的过程 20 世纪 70 年代从一些 RNA 肿瘤病毒如鸟类成髓细胞白血病病毒和劳氏肉瘤病毒中分离到一种独特的 RNA 指导的 DNA 聚合酶，由于它以 RNA 为模板合成 DNA，故此称为反转录酶（reverse transcriptase）。 以病毒 RNA 为模板，以 4 种 dNTP 为底物，按 5’ → 3’ 方向催化合成，形成 RNA-DNA 杂交链，其中的 DNA链称为互补 DNA 链（cDNA ）。 RNA 被降解 ，再以新合成的 DNA 链为模板，合成另一条互补的 DNA 链，形成双链的 DNA 分子。 新合成的双链 DNA 分子进入宿主细胞核，整合到宿主的 DNA 中，随宿主 DNA 一起复制传递给子代细胞。在某些条件下此潜伏的 DNA 可以活跃起来转录出病毒 RNA 而使病毒繁殖，另一些条件下它也可以引起宿主细胞发生癌变。 反转录酶 2 0世纪 80 年代末发展起来的一种 DNA 特定片段体外快速合成扩增的方法。称多聚酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR） 多聚酶链式反应 ⑴ 微量离心管，适量的缓冲液，模板DNA，2个 DNA 引物，4 种 dNTP，聚合酶和 Mg2+。 ⑵ 高温变性 上述溶液加热，模板 DNA 高温下变性双链解开变单链（如 95℃）； ⑶ 低温退火 降低温度，两条引物分别与两条模板互补退火，形成局部双链（37℃-65℃）； ⑷ 中温延伸 升高温度至中温（72℃），聚合酶以 dNTP 为原料，以两引物为复制的起点，在两条模板上合成新的 DNA 子链； ⑸ 重复高温变性、低温退火和中温延伸三个