第二章分析化学中常用的分离与富集方法资料.pptVIP

三.纸色谱和薄层色谱法的基本操作 另一方面，组分的移动距离还与两相的体积比有关，K?Vs/Vm?d2/d1 ； 综合以上两式：d2/d1=K?(Vs/Vm) 　 根据Rf的定义，可推出： 　　　 K=Vm/Vs(1/Rf -1) 如果实验条件固定，则决定组分Rf值的主要因素为它的分配系数。 　 在分配色谱中，当固定液的极性大于流动相的极性时，称为正相色谱；当固定液的极性小于流动相的极性时，称为反相色谱。 　 薄层色谱法(thin layer chromatography)是在纸色谱法的基础上发展而来。薄层色谱按其分离机理也可分为两种，即分配色谱和吸附色谱。 　通常在纸色谱中，因固定相(水)的极性较强，所以常属于正相色谱；如果将滤纸用极性较低的液体(如烃类)进行处理替代水作固定液，而以极性较大的溶剂为流动相，即可形成反相纸色谱。 2.薄层色谱法 　 吸附色谱是利用吸附剂对试样中各组分吸附能力的不同来进行分离。 　 分配色谱是利用试样中各组分在流动相和固定相中溶解度的不同，在两相间不断进行分配而达到分离的目的。 在一定温度下，组分在固定相与流动相之间的分配情况可用分配等温线表示，即达到分配平衡时组分在固定相中的浓度对流动相中浓度作图得到的曲线(固定相为吸附剂时称为吸附等温线)。 　 常用流动相按极性增强次序排列如下： 石油醚、环己烷、四氯化碳、苯、甲苯、氯仿、 乙醚、乙酸乙脂、正丁醇、正丙醇、1,2-二氯 甲烷、丙酮、乙醇、甲醇、水、吡啶、醋酸。 3.分配等温线 　一般有三种形式：　　 第一种为直线型，此时组分在两相间的分配与组分浓度无关，这种类型的物质展开后，斑点对称，形状较好一般呈圆形。 第二种为凸线型，又称Langmuir等温线，当组分浓度较高时，曲线向下弯曲，浓度大的区域较浓度小的区域移动快，在展开过程中形成前沿清晰而后面拖尾的斑点。 第三种为凹线型，又称Frenundlich等温线，与凸线型相反，组分浓度较高时移动慢，斑点的后沿清晰而前沿呈“伸舌头”状。 从三种等温线图可看出，在低浓度时它们都有一段呈线性的关系。 　　分离时如将样品量控制在一定范围内，则可获得较好的斑点形状，有利于鉴定和定量。 　 两种方法的基本操作相同，包括点样、展开、显色、定位等几个步骤。分别概述如下： 1.薄板的制备 (1)干法制板： 将固体吸附剂(氧化铝或硅胶)均匀撒在薄层上，用手拉动两端带有套圈的玻棒，套圈的厚度即为薄层所需的厚度，一般为0.25~0.3mm。 此法的缺点：薄板不易保存，展开时毛细管作用力大，斑点较易扩散，展开方式只能近水平位置。 (2)湿法制板：称取一定量的吸附剂用适量溶剂(通常为水)调成糊状；根据所需薄层厚度及玻板的大小，量取一定体积的吸附剂糊状物倒在 板上，振动，使之均匀分布形成薄层，然后平放阴干，置烘箱中活化(80～105℃) 1/2～2h，放于干燥器中备用。 最常用的吸附剂有硅胶，氧化铝，其次是聚酰胺，硅酸镁等；活性炭的吸附性太强，又呈黑色，不易观察；故现在很少使用。 2.点样 在纸或薄层板的一端约1～3cm处点上样品溶 液，等溶剂挥发后即将纸或薄板放入缸内或 槽内展开。 3.展开 　所谓展开即使流动相溶剂沿滤纸或薄层板 从点有样品的一端向另一端流动的过程。样 品中组分被流动相带动前移，并由于各组分 与固定相的作用力不同而得到分离。 　　　 纸色谱分离时，应将滤纸用流动相蒸汽饱和，展开时间也比薄层色谱长些。 4.定位 经上述展开至溶剂前 沿到达纸或薄板另一 端时，即可将其取出。 待溶剂挥发干后，用适当方法确定斑点的位置。如荧光﹑喷试剂等使斑点显色。 纸色谱与薄层色谱的检出方法很相似，根据不同的检出对象与检出目的，可选用不同的试剂与方法。　 　　如果希望定位后，物质不改变，可采用非破环性检出法。 如需确认某一成分，可用专属显色剂或几种显色剂进行定位。 　　一般纸色谱所用的显色剂均可用于分配薄层，但颜色可能不同；薄板的灵敏度通常较纸色谱高；显色剂的应用还取决于载体的性质。 一般定位方法分为物理检出法和化学检出法。 物理检出法属于非破坏性检出法，方法包括使用紫外光、碘和水。 分配薄层的载体和粘合剂均为无机物，可使用很多种试剂包括腐蚀性试剂浓硫酸等；而纸色谱则不能用。 　 对于未知化合物展开后，一般都先使用紫外光进行观察，常用的波长为254nm和365nm。芳香胺化合物使用365nm波长较多。如果被检化合物在紫外区某波长处有较强吸收，其特征为薄板用此波长照射时斑点处会变暗。 　　碘也属于非破坏性显色剂。显色迅速、灵敏。碘的显色反应往往是可逆的；当化合物用I2