食品中微生物快速检验技术教案分析.pptVIP

第六章 食品中微生物快速检验技术 第一节 3M测试片快速分析技术 第二节 Mini-VIDAS快速分析测试技术 第三节 利用电导率快速分析测试技术 胶体金快速诊断技术的应用 病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。 寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙虫病。 细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽等。 胶体金快速诊断技术的特点 简捷快速：操作简单，一般只要5-10min 就会出结果，而其它方法如ELISA需要1-2h，PCR 需要时间更长。 结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。 特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这决定了它具有很好的特异性。 胶体金快速诊断技术的特点 简捷快速：操作简单，一般只要5-10min 就会出结果，而其它方法如ELISA需要1-2h，PCR 需要时间更长。 结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。 特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这决定了它具有很好的特异性。 谢 谢！ 三、 膜过滤荧光染色法仪器 第六章 食品中微生物快速检验技术 第四节 膜过滤荧光染色法 一、利用葡萄糖醛酸酶定量检测E. Coli 大肠杆菌重要卫生学指标，是环境监测、食品安全、卫生防疫监测中必检的一个项目。传统的大肠菌群检测法试验过程繁杂、检测工作量大、费用较高，而且不适合进行大肠杆菌定量检测。 绝大多数大肠杆菌具有葡萄糖醛酸 酶，能分解葡萄醛酸苷。使无色原性- 底物（4甲基伞花内脂β-D葡萄糖苷酸） 生成甲基伞形酮葡萄糖苷酸，在365nm 紫外灯下观察出现蓝亮色荧光，可以实 现定量检测。 第六章 食品中微生物快速检验技术 第五节 利用酶促反应定量检测微生物 二、 ATP荧光法检测总菌落数 第六章 食品中微生物快速检验技术 第五节 利用酶促反应定量检测微生物 萤火虫会发光是由于它能合成 将化学物质的化学能转变为光能的 生物催化剂—荧光素酶、虫荧光素 (D-luciferin)以及所有细胞生物 都产生的生物能量物质—三磷酸腺苷（ATP）。 在有氧的条件下，虫光素酶催化虫荧光素和ATP之间发生氧化反应，形成氧化荧光素并发出荧光，其生化反应式如下： 二、 ATP荧光法检测总菌落数 第六章 食品中微生物快速检验技术 第五节 利用酶促反应定量检测微生物 上式表明，只要具备适当条件，不仅萤火虫，即使在试管中 也能发出荧光。当反应系统中，虫光素酶和虫荧光素处于过量 的情况下，荧光的强弱取决于ATP的数量。 在食品样品中，细菌细胞越多，ATP量越高，发出的荧光也 就越强。 所以，在排除样品中非细菌ATP干扰的情况下，通过荧光值 就能确定样品中细菌ATP的含量，从而确定细胞数量。 检测原理 荧光素 荧光素酶 腺苷一磷酸 氧合荧光素 荧光 三、 MTT法检测总菌落数 第六章 食品中微生物快速检验技术 第五节 利用酶促反应定量检测微生物 检测原理为活体微生物线粒体中含有琥珀酸脱氢酶，能使外源性MTT（噻唑蓝）还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。 Formazan结晶形成的量与活菌数成正比。用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值， 可间接反映活菌细胞数量。 该方法的特点是检测灵敏度高、快速 。在肿瘤细胞杀伤药物筛选中应用广泛， 在食品卫生监测中也有应用的报道。 三、 MTT法检测总菌落数 第六章 食品中微生物快速检验技术 第五节 利用酶促反应定量检测微生物 应用实例1：巴氏消毒奶中活菌素快速检测 取巴斯消毒奶10mL ，至于无菌离心管中3000rpm离心5分钟，弃去上清。加入10mL无菌生理盐水洗涤离心管，再次3000 rpm离心5分钟，弃去上清取出奶液基质。加入1mL生理盐水重悬底部的微生物，取0.2mL到96孔酶标板中，同时加入标准菌液做标准曲线，统一加入底物反应30分钟，读数。 一、 血清学方法 第六章 食品中微生物快速检验技术 第六节 利用免疫反应快速检测微生物 图示几种操作类型的原理 一、 血清学方法(基本原理回顾第3章) 第六章 食品中微生物快速检验技术 第六节 利用免疫反应快速检测微生物 实例1：化脓性链球菌的免疫聚集快速检测 菌体凝集试验 免疫散射比浊法 二、 酶联免疫吸附检测方法 第六章 食品中微生物快速检验技术 第六节 利用免疫反应快速检测微生物 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异 性反应与酶对底物的高效催化作用相结合的一种敏感性 很高的实验技术。 分点理解: