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四川省岳池县第一中学2014-2015学年高中生物 专题5 课题1 第2课时 DNA的粗提和鉴定课前预习学案 新人教版选修1 使用说明与学法指 1．回顾DNA提取原理与选材 2．掌握DNA提取过程与纯化及鉴定方法 知识准备 1．DNA提取原理与选材 2．提取生物大分子的一般思路 教材助读 一、DNA的粗提取主要实验步骤（以鸡血红细胞为例） 二、提取DNA的鉴定 1、方法： ①取甲、乙两支试管，并向其中加入5mL（等量）的2mol/LNaCl溶液； ②向甲试管中加入粗提取的DNA，并搅拌使DNA溶解； ③向两支试管中各加入4mL（等量）二苯胺试剂，混匀，沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管的颜色（蓝色）变化。 2、注意点：实验中需要对照，目的：证明 三、知识注解 1、破碎细胞，释放DNA 动物：在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，使其吸水胀破，达到破碎细胞的目的。加入蒸馏水的同时，要用玻璃棒进行搅拌。 方法：单向，快速，5min，力量不要过于猛烈，防治打碎DNA。目的是加速血细胞破裂 注意：鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液 问题：这是我们获得的将是含有细胞膜、细胞器的碎片液体，如何初步获得含有DNA的液体? 过滤（ 需要用到3-4层纱布，除去一些颗粒较大的杂质，获得含有DNA的滤液。） 植物：植物细胞有细胞壁的支持和保护，因此吸水不会涨破。我们通常通过研磨来破碎植物细胞的细胞壁。在研磨的过程中，一般还会加入洗涤剂和食盐。 洗涤剂的作用：洗涤剂也分为亲水基团和亲脂基团，可以与细胞膜中的蛋白质结合，使之溶解，进而瓦解细胞膜。 食盐的作用：食盐中主要含有NaCl，有利于DNA的溶解。 问题：这时的滤液可能含有哪些细胞成分？ 主要有RNA、核蛋白、多糖等 2. 溶解细胞核内的DNA 在浓度较高的NaCl溶液溶液中核蛋白容易解聚，游离出的DNA溶解在溶液中。 方法：在溶液中加入两倍体积的浓度为2mol/L的NaCl溶液，用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使DNA充分溶解。 4. DNA的初步纯化 如果提取的DNA量不够且其中含有较多杂质，是无法用于其它操作的。所以我们必须对DNA进行进一步的纯化。 原理：DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。在实验中，我们可以使用预冷的酒精，使DNA能够更好地凝结 方法：将DNA粘稠物再溶解，继续用2mol/L的NaCl溶液20mL溶解DNA黏稠物，仍旧沿一个方向不停搅拌3min，使DNA充分溶解。 过滤:用3～4层纱布进行过滤，滤去杂质，收集含有DNA的滤液。 纯化：向滤液中贴壁缓慢加入50mL预冷的体积份数为95%乙醇，并用玻璃棒朝一个方向缓慢、均匀地搅拌，溶液中会出现DNA丝状物。 预冷的酒精具有以下优点： ①、抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解 ②、降低分子运动，易于形成沉淀析出 ③、低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂 5. DNA的鉴定 原理：二苯胺法 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺变蓝。 方法：在2mol/L的NaCl溶液5mL，放入丝状物，用玻璃棒搅拌，使之溶解。加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。 问题：如果溶液变蓝是否能说明DNA的存在? 设置对照：在5mL 2mol/L的NaCl溶液中加入4mL的二苯胺试剂，置于沸水中加热5min。 对比：甲基蓝鉴定DNA？ 用甲基绿溶液直接滴在有DNA丝状物的载玻片或玻棒上，呈蓝绿色反应。只用一种即可，不混合用。前者要加热，后者不加热课内探究 知识网络图 ①破碎细胞，释放DNA（核物质） ②溶解细胞核内DNA 提取主要步骤 ③DNA析出 ④DNA的初步纯化 DNA的粗提和鉴定 鉴定原理 鉴定 试剂：二苯胺 显蓝色（沸水） 当堂检测 1．DNA粗提取的实验中，先后两次向烧杯中加入蒸馏水的作用分别是（ ） A．稀释血液；冲洗样品 B．使血细胞破裂；降低NaCl浓度，使DNA析出 C．使血细胞破裂；增大DNA溶解量 D．使血细胞破裂；提取含杂质较少的DNA 2．在提取的细胞核物质的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的