2.10基因工程制药-基因工程药物的分离纯化解析.pptVIP

七、选择分离纯化方法的依据 1、根据产物表达形式来选择 分泌型表达产物的发酵液体积很大但浓度较低纯化 前必须浓缩可用沉淀和超滤法。 产物在周质表达是介于细胞内可溶性表达和分泌表 达的一种形式，它可以避开可溶性表达蛋白和培养 基中蛋白类杂质，在一定程度上有利于分离纯化. 为了获得周质蛋白经低浓度溶菌酶处理后,可采用渗 透压休克的方法来获得。 可溶性表达产物破菌后的细胞上清，首选亲和分离 方法，或离子交换层析。 应选择不同机制的分离单元组成一套分离工艺，尽 早采用高效的分离手段。 先将最多的杂质去除，将费用最高、最费时的分离 单元放在最后阶段，即通常先运用非特异、低分辨 的操作单元（如沉淀超滤和吸附等），以尽快缩小 样品体积，提高产物浓度，去除最主要杂质（包括 非蛋白类杂质）。 2、根据分离单元之间的衔接选择 随后采用高分辨率的操作单元（离子交换层析和亲 和层析）凝胶过滤放在最后，这样可以提高分离效 果。 层析分离次序的选择同样重要，合理的组合能提高 分辨效率，并有利于各步骤间的过渡。如离子交换 层析、亲和层析、凝胶过滤。 3、根据分离纯化工艺的要求来选择 分离纯化工艺应遵循以下原则： ⑴具有良好的稳定性和重复性； ⑵尽可能减少组成工艺的步骤； ⑶各技术步骤间要相互适应和协调； ⑷工艺过程中尽可能少用试剂； ⑸工艺所用时间要短； ⑹工艺和技术必须高效，收率高、易操作