第五章体外技术要点分析.pptVIP

IRMA和RIA的区别： 反应机制不同 反应试剂 分离方法不同 剂量关系 反应中的NSB IRMA和RIA工作原理的主要区别： 作业 免疫放射分析与放射免疫分析的区别？ 免疫放射分析与放射免疫分析各有哪些方法？并简要介绍各方法的过程？ (三)实验室间的质量控制： 实验室外质量控制是对各实验室之间测定结果按统一评价方案及方法比较分析，以提高各实验室之间所得结果的可信性和可比性。 第二节 免疫放射分析(IRMA) 一、原理 将过量的标记抗体与抗原结合，分离结合的标记抗体与未结合的多余的标记抗体，测定复合物的放射性，其活度与待测抗原的量呈正相关。 Ag＋*Ab? Ag-*Ab＋*Ab Ag：抗原 *Ab：标记抗体 Ag-*Ab：抗原与标记抗体的复合物 二、特点 免疫放射分析法有以下特点： 1．以标记抗体作为示踪剂。 2．反应动力学：因标记抗体是过量的，且反应是非竞争性的，抗原抗体是全量反应，故反应速度比RIA快。 3．灵敏度明显高于放射免疫分析，约为放射免疫分析的10～100倍。 4．标准曲线工作范围宽。 5．特异性高。 6．稳定性好。 7．目前仅限于蛋白质和多肽抗原。 三、常用方法 抗体夹心法（最常用）： 将分离抗体涂在反应容器的壁上，称固相抗体。固相抗体先与待测抗原反应，形成固相抗体－抗原复合物，再与标记抗体反应，形成固相抗体－抗原－标记抗体复合物附着在管壁上，倾去上清液直接测量反应容器的放射性。 标记第三抗体法：用双抗夹心法中的第二抗体（标记抗体）作为抗原免疫其他的动物获得的抗体为第三抗体。反应后得到固相抗体－抗原－第二抗体－标记第三抗体的复合物。 低剂量区无不确定因素 低剂量区有不确定因素 非特异结合主要影响低剂量区 非特异结合主要影响高剂量区 反应到达平衡快 反应到达平衡慢 AgAb的量与待测Ag的量呈正相关 AgAb的量与待测Ag的量呈负相关 所用抗体是过量的 所用抗体是限量的 二种主要反应试剂 三种主要反应试剂 采用标记抗体 采用标记抗原 非竞争性抗原抗体结合反应 竞争性抗原抗体结合反应 IRMA RIA * * 第五章 体外分析技术 体外分析技术主要是利用放射分析方法或其派生的相关技术在体外进行肌体内物质种类和含量的分析测定。 体外分析技术的典型代表 ——放射免疫分析（RIA） 竞争性体外放射分析法： 非竞争性体外放射分析法： 标记抗原和未标记抗原对抗体都有相同的结合能力，但是当抗体的量有限时，这种结合就出现相互竞争，彼此抑制。 用标记抗体作示踪剂，在反应系统中加入过量的抗体，待测抗原同放射标记抗体进行全量反应。 RIA特点：灵敏度高(可测水平达10-12—10-15g) 特异性强 操作简便，成本低 应用广泛 目前可用RIA测定的微量物质：激素、蛋白质、环磷酸腺苷、抗原、抗体、维生素、药物等300多种 第一节 放射免疫分析(RIA) 放射性标记的抗原和非标记抗原(标准抗原或被测抗原)同时与限量的特异性抗体进行竞争性免疫结合反应，这种竞争关系可用以下反应来表示： *Ag：标记抗原 Ag：非标记抗原 Ab：特异性抗体 *Ag-Ab：标记抗原抗体复合物 Ag-Ab：非标记抗原抗体复合物 一、基本原理： *Ag与Ag的免疫活性完全相同，对Ab具有同样的亲和力； 当*Ag和Ab为恒定量，Ag和*Ag的总量大于Ab上的有效结合点时， *Ag-Ab的形成是随着Ag量的增加而减少，剩下来的未结合或游离的*Ag则随着Ag量的增加而增加； 测定*Ag-Ab或*Ag即可推出被测的Ag量。 放射免疫分析原理示意图? 标准曲线 ： 配制一系列已知浓度的标准抗原，分别向其中加入固定量的标记抗原和抗体，反应平衡后，分离抗原的结合部分和游离部分，测定*Ag-Ab的放射性B或游离*Ag的放射性F，计算出结合率B%［B/(B+F)×100%］或其他指标。 以B%或B/B0%为纵座标，标准抗原的浓度为横座标，绘制曲线即为标准曲线(standard curve)。 （一）抗体： 抗体的亲和力 是抗体与抗原之间相互作用的一种结合能力或强度。亲和力大即免疫结合既快又牢固，不易重新解离。 Ag + Ab　　 Ag-Ab k1 k2 亲和力的大小用亲和常数（affinity constant）Ka值来表示，Ka＝