2.核酸的分离纯化解析.pptVIP

第二章 核酸的分离纯化 DNA和RNA是生物体中最重要的核酸分子，是分子生物学和分子诊断的研究对象 DNA和RNA的分离纯化是分子生物学研究及分子诊断最基础的工作 核酸分离纯化的原则: 保持核酸一级结构的完整性 尽可能提高核酸制品的纯度 第一节 核酸分离纯化的设计及原则 （一） 材料与方法的选择 不同的研究目的对核酸的完整性、纯度、 产量及浓度有不同的要求。 需考虑制备核酸所需的时间与成本 应选择安全的试剂与制备方案 （一）核酸的释放 DNA和RNA均位于细胞内（病毒除外），因此核酸分离与纯化的第一步即是裂解细胞、释放核酸。 应该清除的杂质主要包括: 1.非核酸的大分子污染物 蛋白质、多糖及脂类物质等 2.非需要的核酸分子 分离某一核酸分子时，其它核酸皆为杂质 3.加入的有机溶剂和某些金属离子 （三）核酸的浓缩、沉淀与洗涤 沉淀是浓缩核酸最常用的方法 常用的盐类:醋酸钠、醋酸钾、醋酸铵、氯化钠、氯化钾及氯化镁 常用的有机溶剂:乙醇、异丙醇和聚乙二醇 核酸沉淀常常含有少量共沉淀的盐，需用70%～75%的乙醇洗涤去除 紫外分光光度法： 核酸分子中的碱基具有共轭双键结构，可以吸收紫外线，其最大吸收波长为260nm。 荧光光度法：