(理科选修三)221动物细胞培养和核移植技术解析.pptVIP

无菌、无毒环境 营养：糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、微量元素、动物血清等 温度和PH：36.5+0.5度，pH7.2～7.4 气体环境： O2和CO2 ，CO2可维持培养液pH（5%的CO2 培养箱） 植物组织培养和动物细胞培养的比较 五、体细胞核移植技术存在的问题 胚胎移植－动物幼体产出 概率＜10％ 克隆动物存在着健康问题 克隆动物的食品安全性问题存在争议 1、定义：指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。 人们获得抗体的传统方法是? 将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体 这种方法的缺点是什么? 效率低，产量有限，纯度低，而且制备的抗体特异性差。 怎样获得单一类型的抗体？ 单克隆抗体的制备—极富创造性的方案 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)的设想： 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。 米尔斯坦和科勒因此在1984年获诺贝尔奖。 * * 动物细胞工程 植物细胞工程 细胞工程的基本技术 植物组织培养 植物体细胞杂交 1.动物细胞培养 3.动物细胞融合 4.生产单克隆抗体 2.动物细胞核移植 （基础） 从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后,放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 1.1动物细胞培养概念： 为什么要进行动物细胞培养？ 如何培养动物细胞培养？ 胚胎或幼龄动物器官、组织 1.2动物细胞培养过程： 用胰蛋白酶处理分散成单个细胞 细胞悬液 原代培养 传代培养 幼龄动物的组织细胞比老龄动物分化程度低，增殖能力强，更易于培养 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤 维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一 定弹性和韧性的组织和器官 原代培养：动物组织消化后的初次培养 动物细胞的贴壁生长 原代培养：动物组织消化后的初次培养 细胞贴壁：培养贴附性细胞时，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上 接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖 传代培养：当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理，并分瓶继续培养的过程 原代培养 （分瓶之前） 传代培养 （分瓶之后） 关于原代培养，注意： 关于传代培养，注意： 1 2、细胞培养到50代后，大部分细胞会死亡，少数细胞的细胞核型会发生变化，获得不死性，并带有癌变的特点。 细胞株：传代细胞一般能传到40-50代，遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。 细胞株、细胞系（了解即可，老课本体系） 细胞系：传代50代以后又出现细胞生长停滞状态，部分细胞遗传物质发生了改变，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。 ▲细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物 质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑 制，容易传代培养。 1.3 动物细胞培养的条件： 离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力 能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？ 获得细胞或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株 培养目的 葡萄糖、动物血清 蔗糖 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 细胞的全能性 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 5.动物细胞培养技术的应用: 1.蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 2.应用于基因工程 主要用于作为受体细胞 3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1、定义： 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体. 3、分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。 胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易。 动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难 2、原理： 动物细胞核具有全能性 卵细胞 黑面母绵羊 白面母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 早期胚胎 卵裂 第三只母绵羊子宫 胚胎移植 多莉羊 分娩 妊娠 多莉羊的培育过程 融合后的卵细胞 ◆注意：克隆动物性状 与供体动物完全一样吗？ ◆取供体细胞传代培养10代以内的细胞.为什么？ ◆用的是去核的减数第二次分裂中期细胞（MⅡ中期）为什么？ ◆激活方法： ◆激活目的： ◆促融方法：电刺激 ◆胚胎移植至代孕受体内 妊娠、分娩 体细胞核移植流程 供体：优质高产奶牛 受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养） 1.体积大，易操作。2.含有促使细胞核表达