系统生物学要点分析.pptVIP

热不稳定 难挥发 极性强 分子量大 FAB 特点： 不仅有较强的分子离子峰，而且碎片离子峰也很丰富； 不需要将试样加热气化，适合热不稳定、难挥发样品分析； 试样用量少并可回收; 样品涂在金属板上的溶剂也被电离，谱图复杂化。 获得是（M+H）+或（M+Na）+等准分子离子峰；碎片峰比EI谱要少。 FAB 喷雾针装置 喷雾室 毛细管 四极预杆 干燥气 ESI 电喷雾源结构图 ESI 分子量大、稳定性差的化合物 蛋白质 肽 糖 可形成多电荷离子，使分子量大的化合物质荷比小，进入分析范围 ESI 用于液相色谱-质谱联用仪，作为液相色谱和质谱仪之间的接口装置，同时又是电离装置。 电喷雾喷嘴：1.多层套管，内层液体，外层氮气，是使喷出的液体容易分散成微滴 2.不能正对取样孔防止堵塞。3.喷嘴和锥孔之间加电压，可正可负 补助气喷嘴：喷嘴斜上方，使微滴的溶剂快速蒸发 微滴蒸发，表面电荷密度增加，达到临界值时，离子蒸发出来，借助喷嘴和锥孔之间电场进入分析器 APCI 结构图 APCI 主要用来分析中等极性的化合物 APCI是ESI的补充，离子产率高 主要产生单电荷离子 质谱很少有碎片离子，主要是准分子离子 用于液相色谱-质谱联用仪 APCI 结构与ESI大致相同，在喷嘴下游放置针状放电电极。电极放电，电离空气中的中性气体分子和溶剂分子，产生H3O+，N2+，O2+和O+等离子，离子与分析物分子进行离子-分子反应，使分析物分子离子化。反应过程：1.质子转移和电荷交换产生正离子，2.质子脱离和电子捕获产生负离子。 电离室原理与结构 仪器原理图 原理与结构 在磁场存在下，带电离子按曲线轨迹飞行； 离心力 =向心力；m ? 2 / R= H0 e V 曲率半径： R= （m ? ）/ e H0 质谱方程式：m/e = (H02 R2) / 2V 离子在磁场中的轨道半径R取决于： m/e 、 H0 、 V 改变加速电压V, 可以使不同m/e 的离子进入检测器。 质谱分辨率 = M / ? M （分辨率与选定分子质量有关） 加速后离子的动能 : (1/2)m? 2= e V ? = [(2V)/(m/e)]1/2 质量分析器原理 MALDI-TOF-MS是利用基质吸收激光的能量将固相的多肽样品转换成离子信号， 获得蛋白质的肽质量指纹图谱(PMF)，然后与数据库中理论肽质量相配比来鉴定蛋白质 串联质谱主要分为3 类，即MALDI串联两级TOF质谱系统(MALDI-TOF/TOF MS)、串联四极杆-TOF质谱系统(QQ-TOF MS)和串联四极杆-线性离子阱杂交型质谱系统，在蛋白质研究领域中发挥着越来越重要的作用，成为蛋白质组学的最领先工具 新近发展迅速的一种新的质谱技术是表面增强激光解析离 子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS), （SELDI-TOF-MS),技术实际上是一种为蛋白质芯片检测而开发的质谱技术，可直接在固相的吸附了蛋白质的芯片表面，使用脉冲氮激光能量，使被捕获的靶蛋白从芯片表面电离出来，根据靶蛋白在离子装置中的飞行时间， 测量出蛋白质的质量和电荷。 生物标记物 定量 是否存在表达差异 疾病诊断 两种方法： 1：一种是通过无标记的蛋白质二维凝胶电泳(two dimensional gel electrophoresis, 2DE). 首先对蛋白质混合物进行分离, 然后通过比较不同凝胶上的表示同一个蛋白质的点的着色强度来得到其定量信息. 最后对选出的蛋白质点经过胶切、蛋白酶水解和质谱检测进行鉴定分析. 两种方法： 2：另一种是近几年发展起来的通过标记物实现量化信息的获取, 基于蛋白质的同位素标签和自动化的串联质谱检测分析方法. 在这种方法中, 通过代谢标、酶反应或化学反应, 用不同的同位素标签标记存在于不同样品中的蛋白质,然后将不同标记的样品混合在一起, 同时进行处理分析. 在本方法具体实施时,该混合的差异标记样品经过酶解, 得到的肽混合物再经过液相色谱(liquid chromatography, LC)和串联质谱分析. 这样, 蛋白质的定性鉴定与定量分析是通过其对应的肽的鉴定与定量完成的. 困难： ① 源于同一个蛋白质的多个肽可能被鉴定出来, 而它们的量化信息不一致. ② 同一个肽可能以不同的同位素身份或带电荷状态被多次鉴定出来. ③ 某个肽可能是错误鉴定的或翻译后修饰的. ④ 肽信号的数据质量, 即信噪比(signal-to-noise ratio, S/N)有时较低. 所以, 人们要想可靠且自动地评价蛋白质的量化结果, 必须得有高级的数据处理方法来综合考虑所有这些复杂的影响因素. 疾病蛋白质组学主要研究寻找各种疾病的特异性标志蛋白质, 进而应用于临床诊断和药物开发等, 因