仪器——荧光光谱分析报告.ppt

现代仪器分析 第一节 概述 一、分子发光 某些物质的分子吸收一定能量跃迁到较高的电子激 发态后，在返回电子基态的过程中伴随有光辐射。 二、分子发光类型 1、 按激发模式 ①光致发光 ：分子因吸收外来辐射的光子能量而被激 发所产生的发光现象。 ②化学发光：分子的激发能量是由反应的化学能量提 供的发光现象。 ③生物发光：分子的激发能量是由生物体释放 出来的能量所提供所产生的发光现象。 2、按分子激发态的类型来划分 ①荧光：由第一电子激发单重态所产生的辐射 跃迁而伴随的发光现象。 ②磷光：由最低的电子激发三重态所产生的辐 射跃迁而伴随的发光现象。 第二节 分子荧光分析法及其基本原理 一、荧光与磷光的产生过程 2.电子激发态的多重态 3.激发态→基态的能量传递途径 （1）无辐射能量传递过程 振动弛豫：同一电子能级内以热能量交换形式 由高振动能级至低相邻振动能级间 的跃迁。10-12s。 内转换：同多重态电子能级中,等能级间的无辐 射能级交换。 10-11s～10-13s 通过内转换和振动弛豫，高激发单重态的电 子跃回第一激发单重态的最低振动能级。 外转换：激发分子与溶剂或其他分子之间产生 相互作用而转移能量的非辐射跃迁； 外转换使荧光或磷光减弱或猝灭。 系间跨越：不同多重态,有重叠的转动能级间的 非辐射跃迁。 10-2s～10-6s 改变电子自旋，禁阻跃迁，通过自旋—轨 道耦合进行。 （2）辐射能量传递过程 荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动 能级→基态（ 多为S1→S0跃迁）， 发射波长为 ? ‘2的荧光。 10-7～10 -9 s 发射荧光的能量比分子吸收的能量小，波长 长； ? ‘2 ? 2 ? 1 ； 延迟荧光：分子跃迁至T1态后，因相互碰撞或 通过激活作用又回到S1态，经振动 驰豫到S1态的最低振动能级再发射 荧光。 磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动 能级→基态（ T1 → S0跃迁）； 电子由S0进入T1的可能过程：S0→T1禁阻跃迁 S0 →激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→ T1 发光速度很慢： 10-4～100 s 。光照停止后， 可持续一段时间。 （3）瑞利散射光和拉曼光 ①瑞利散射光 激发光的能量不足，将电子激发至基态中较高的振 动能级，假如电子在受激后能量没有损失，并且在瞬 时返回原来的能级，于是便在各个不同的方向发射和 激发光相同波长的辐射，这种辐射称为瑞利散射光。 ②拉曼光 被激发到基态中其它较高振动能级的电子，当它返 回到比原来的能级稍高或稍低时，便伴随着产生波长 略长或略短于激发光波长的拉曼散射光。 二、分子荧光分析的基本原理 1、激发光谱与荧光(磷光)光谱 （1）.荧光(磷光)的激发光谱 曲线 固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光(磷光)强度与照射光波长的关系曲线 （图中曲线I ） 。 激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子 最多，荧光强度最大。 （2）.荧光光谱 (或磷光光谱 ) （3）.激发光谱 与发射光谱 的关系 ③.镜像规则 2、 荧光强度及其与浓度的关系 （1）量子产率及影响因素 表示物质发射荧光的能力 。 ? = 发射的光子数 / 吸收的光子数 荧光量子产率与激发态能量释放各过程的速率常数 有关，如外转换过程速度快，不出现荧光发射。由于 激发分子的去活化过程包括辐射跃迁和非辐射跃迁， 因而荧光量子产率也可表示为： ? =kf/(kf+∑K) kf：辐射跃迁速率，∑K：非辐射跃迁速率 （2）荧光强度与浓度的关系 ①在稀溶液中（?bc＜0.05)，荧光强度与荧光物质的 浓度成正比。 If =2.3 ? I0 ?bc 荧光强度If正比于吸收的光量Ia与荧光量子产率? 。 在一定条件下： If = K c ②在浓溶液中，荧光强度常常随溶液浓度增加而下降 a 因入射光强度大大减弱而使所产生的荧光强度大大降低； b. 溶质与溶质间的相互作用产生荧光物质的激发态分 子与基态分子形成复合物； c 自吸收。 3. 荧光与分子结构的关系 （1）分子产生荧光必须具备两个条件： a.具有合适的结构； b.具有一定的荧光量子产率。 （2）化合物的结构与荧光