专题课题月季花药培养(上课使用)分析报告.ppt

课题2 月季的花药培养 花中皇后月季又称“月月红”，自然花期5至11月，开花连续不断 ，通常扦插就可以成活。 知识回顾 单倍体育种的过程？ 花药离体培养（N） 单倍体植株（N） 秋水仙素处理，使染色体加倍 纯合二倍体植株（2N） 特点：1 明显缩短育种年限 2 后代植株都为纯合子。 正常植株（2N） 花的结构 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉 花粉是由花粉母细胞（即小孢子母细胞）经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。 花粉的发育要经历：四分体时期、单核期、双核期等阶段。 （一）被子植物的花粉发育 雄蕊 （一）被子植物的花粉发育 1花粉母细胞（2n） 4个小孢子(小孢子 四分体)（n） 减数分裂 有丝分裂 1个花粉管细胞核（n） 1个生殖细胞核（n） 有丝分裂 2个精子 单核居中期（n） 单核靠边期（n） 1、(双选)关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是: A、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的 B、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果 C、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段 D、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞中央 BD 2.有同源染色体存在，但在光镜下一定看不到同源染色体之间两两配对联会的是： A.初级精母细胞　　　　B.小孢子 C.精细胞　　　　　　　D.根尖分生区细胞 D （二）产生花粉植株的两种途径 ① ② 移栽 花药中的花粉 胚状体 脱分化 愈伤组织 花药中的花粉 脱分化 分化 丛芽 再分化 丛芽 诱导 生根 形成原因：主要取决于培养基中的激素的种类及其浓度的配比 部分花药通过胚状体途径形成小植株 烟草花药培养 胚状体发育途径 愈伤组织转接种到再生培养基 愈伤组织分化形成再生植株 水稻花药培养 愈伤组织发育途径 部分花药产生愈伤组织 接种在平板上的水稻花药 1、材料的选择 不同植物的诱导成功率不同. 同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有直接的影响. （一般选月季的初花期） 合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间） 2、培养基的组成（ MS培养基+不同比例的植物生长调节激素） 此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等 (三)、影响花药培养的主要因素 注意：选择最合适的花粉发育时期:单核期 ①不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎； ②不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难； ③挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，微生物少，易消毒。 实验操作 一、材料的选取 二、材料的消毒 三、接种和培养 （一）材料选取 2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色) 焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。 1、从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的 花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色） 花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色） （二）材料的消毒 5、无菌水冲洗3～5次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态 1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒 2、无菌水清洗 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟（质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） 　　为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 　 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 　　为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ （三）接种和培养 1、 灭菌后花蕾，要在 下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。 3、通常每瓶接种花药 ，温度控制在 左右， 。幼小植株形成后才 。 2、 在剥离花药时，要尽量 （否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底 ，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 4、进一步鉴定和筛选：常常会出现染色体倍性的变化 无菌条件 不损伤花药 去除花丝 7-10个 25℃ 不需要光照 需要光照 主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的 课题成果评价 一 选