自杀基因联合中药治疗肿瘤祥解.pptVIP

肿瘤自杀基因治疗及中药方药的增效作用和机制 内 容 研究背景及研究思路 基因治疗的策略 目前常用的肿瘤基因治疗方案 自杀基因的概念 自杀基因治疗的优势 旁杀伤效应 旁杀伤效应作用机制 “缝隙连接”机制 免疫介导机制 “细胞凋亡”机制 介质机制 抗肿瘤血管生成 免疫介导机制 “细胞凋亡”机制 自杀基因引起细胞死亡的形式为细胞凋亡 tk+细胞凋亡形成凋亡小体为tk-细胞吞噬引起tk-细胞死亡 介质扩散 抗肿瘤血管生成 单纯自杀基因治疗存在主要问题 肿瘤自杀基因疗法的增效方法 双自杀基因治疗 联合治疗 联合免疫基因治疗 联合放射治疗 联合化学治疗 联合其他基因 靶向基因治疗 增强旁杀伤效应 HSV-tk/GCV肿瘤自杀基因治疗系统的构建 目的基因（tk基因）的获得 pICl9R/MCl-tk质粒酶切鉴定结果 重组质粒的限制性内切酶鉴定结果 重组质粒的测序图鉴定结果 PT67包装细胞筛选结果 病毒滴度测定及结果 胃癌细胞tk基因的斑点杂交鉴定 GCV对人胃癌细胞SGC-7901的体外杀伤试验 结论及意义 已成功已成功构建了逆转录病毒载体介导的HSV-tk/GCV肿瘤自杀基因治疗系统 HSV- tk/GCV自杀基因治疗系统成功的构建，为后续的研究工作奠定了坚实的基础 分组及治疗 肿瘤生长体积曲线 肿瘤质量及抑瘤率 肿瘤质量图示 病理检查结果(肉眼观察) 病理检查结果(光镜观察 ) 肝癌治疗实验结论 丹参注射液 分组及治疗 成瘤时间 成瘤率 肿瘤生长体积曲线 肿瘤质量及抑瘤率 各组肿瘤质量图示 病理检查结果(肉眼观察) 病理检查结果(光镜观察 ) 恶性黑色素瘤治疗实验结论 技术路线 大鼠肝癌细胞CBRH7919/tk-和CBRH7919/tk+对GCV敏感性（MTT法，72h） CBRH7919/tk-和CBRH7919/tk+不同混合比例对tk/GCV系统旁观者效应的影响(MTT法） 六味地黄丸药物血清联合不同比例tk/GCV系统对大鼠肝癌细胞的作用观察实验小结 （二）中药活性成分对自杀基因旁观者效应影响的体外筛选 对丹参注射液（含水溶性混合成分）、苦参碱、三七总皂甙、芹黄素、白藜芦醇、姜黄素、丹参素、小檗碱、苦参碱、大黄素、木犀草素、黄芩苷、山奈素、枸杞多糖等进行了筛选实验。 重组质粒的构建方案 25.9±4.6 b 31.0±3.5 b 48.8±7.0 b 57.3±5.2 b 71.0±9.0 a 92.6±10.9 98.2±5.5 100％ 7 60％ 6 40％ 5 20％ 4 10％ 3 5％ 2 0％ 1 GCV15.7μM 存活率（%） tk+ 细胞比例（％） 组别 aP ?0.05, bP ?0.01,与组1比较 (一)六味地黄丸药物血清联合不同比例tk/GCV系统对大鼠肝癌细胞的作用观察 1.19 1.12 100.00±15.24 69.70±15.12 63.60±1.71 122.04±5.99 109.67±11.85 94.78±6.86 128.79±11.91 109.53±9.71 69.87±28.12 a 128.06±0.90 105.47±7.71 90.51±9.85 120.06±9.27 93.58±4.96 56.86±13.71 a 0 5 7.5 Q值 GCV GCV 5%tk/GCV (0μM) (39.2μM) (39.2μM) 对照 对照 对照 含药 含药 含药 血清（%）