病理和组化课件解析.pptVIP

综 合 实 验 多 媒 体(综V-技术进展）主讲 杨廷桐 形态学实验室 2006年6月5日 凉 爽 风 综合实验 综合实验 是将正常与异常结构，单一学科与边缘学科知识，基础知识与临床技能有机的统一的融合在一起，使学生扩大知识面，扩展思路，动态学习思维，知识网络化，锻炼学生动脑，动口，动手，动眼的能力。培养学生敏捷的思路，综合分析，动与静的结合，动态演变判断，初步具有基本的科研素质和运用基本知识解决临床问题的能力。 一、??? 指导思想 当今社会信息、技术、人才三足订立，如何掌握先进的技术去获取更多的信息，是培养综合素质人才的关键。在实验室让学生掌握、了解组织病理学常用的先进技术及其原理和应用，为将来学生走向临床，走向科研工作打下较为坚实的理论知识和实践技能，培养学生逐渐的由基础走向临床，走向科研工作，培养出具有时代特征的、能适应社会发展的、能够解决问题的高素质人才。组织病理实验技术的理论知识掌握和应用实践，是培养学生基本技能和初步科研基础的必要途径，为日后走向临床，走向科研打下坚实的基础。 二、实验目标 1.?????? 掌握常规组织病理学石蜡切片的操作过程及HE染色程序 2.?????? 熟悉免疫组织化学技术的操作过程及应用 3.?????? 了解电子显微镜技术、原位多聚酶链反应技术、流式细胞技术等技术的应用 三、实验内容：（5学时） 在大体和显微镜水平上的形态学观察技术，是病理学研究和学习的最传统技术。随着分子生物学研究的进展和分子病理学相应技术的建立，分子生物学的很多技术都可以成为病理学的研究方法。学习和了解这些方法技术，对于我们以后从事临床或科研活动，建立良好的必要平台和打下一定的基础。 实习内容 1.?????? 常规组织病理学石蜡切片的操作过程及HE染色 程序实习 2.?????? 免疫组织化学技术见习 3.?????? 电子显微镜技术多媒体讲解 4.?????? 原位多聚酶链反应技术多媒体讲解 5.?????? 核酸原位杂交技术多媒体讲解 6.?????? 流式细胞技术多媒体讲解 7.?????? 生物芯片技术多媒体讲解 8. ???图像分析术??? 三、?????? 注意事项 1.??请课前预习相关综合实验内容。 2.?学习相关的边缘学科知识---生理学、解剖学 、 病理生理学、细胞生物学等。 3.? 预习相关的组织学、病理学的理论知识。 4.??重点掌握疾病的动态演变过程。 5.?学会运用所学知识，进行综合分析、推理、 判断与鉴别的基本方法。 6.掌握运用基础知识解决临床问题的技巧。 大体与常规组织病理学技术 大体观察 主要应用肉眼或辅以放大镜、量尺和磅秤等工具，对大体标本的病变性状（行状、大小、重量、色泽、质地、表面及切面形态、与周围组织和器官的关系等）进行细致的解剖、观察、测量、取材和纪录，必要时可摄影留作资料。大体观察不仅是病理医师的基本功和正确病理诊断的第一步，也是医学生学习病理学的主要方法之一。 石蜡切片术（paraffin sectioning）与苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining) 取材和固定 取材和固定——用蛋白质凝固剂（常用甲醛）固定新鲜的组织块（多不超过1.0cm大小）以在很大程度上保存组织的原本结构。 脱水和包埋 切片和染色 切片和染色——江包有组织的蜡块用切片机切为5-10um的薄偏,贴于载玻片上,脱蜡后进行染色,以提高组织成分的反差,利于观察.追常用的是苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining),简称HE染色法.苏木精染液为碱性,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色. 易于被碱性和酸性染料着色的性质分别称为嗜碱性（basophilia）和嗜酸性（acidophlia）. 封片 特殊1 除石蜡切片外，在制作较大组织块（如眼球、脑）的切片时，常用火棉胶包埋。在要进行某些组织化学反应的标本，为保存蛋白质（包括酶）的结构和活性，常把组织块经液氮（—196℃）冷冻后，用恒冷箱切片机切片（冰冻切片）。此外，可将游离的细胞（如血细胞）直接涂于玻片（涂片）；将疏松结缔组织或肠系膜等撕成薄片铺在载玻片上（铺片）；骨和牙等硬组织可磨为薄片（磨片）。 特殊2 显微镜观察 以上方法制备的标本一般使用普通光镜进行观察，这是组织病理学研究的最基本技术。通常光学显微镜可放大1500倍左右，分辨率为0.2um。常用计量单位为微米（um），1微米（micrometer，um）=1/1000毫米（milimeter，mm）。在组织化学术，常使用荧光燃料染色或作为标记物，用荧光显微镜（fluorescence microscope）观察。荧光显微镜以紫外线为光源，能激发燃料发出荧光。在细胞培养