不同品种小麦愈伤对除草剂的抗性研究.docVIP

不同品种小麦愈伤对除草剂的抗性研究 摘要：以4个小麦品种的幼胚为外植体,采用MS诱导培养基和分化培养基,研究不同基因型间愈伤组织诱导的差异,以及浓度对愈伤组织的影响。随浓度的增大,小麦幼胚分化率esearch of different varieties of wheat callus on herbicide resistance Abstract：Immature embryos of four wheat varieties as explants，using MS induction medium and differentiation medium，Research between different genotypes of callus induction of the differences ， 1 材料与方法 1.1 材料 供试小麦品种为郑麦9023、郑麦366、周18、矮抗58，所有材料均播种于河南农业科学院试验田。 培养基 诱导愈伤组织培养基：MSD2+3.0％蔗糖+2.0mg/L麦草畏+15.mg/L天门冬酰胺+8g/L琼脂，PH=5.8； 愈伤组织筛选培养基：MS基本培养基+不同浓度glyphosate +3.0％蔗糖+8g/L琼脂，PH=5.8； 分化培养基：MS基本培养基+ +2.0mg/LKT+1.0mg/LIAA+3.0％蔗糖+8g/L琼脂,PH=5.8； 生根培养基：1/2 MS基本培养基+0.5mg/LNAA+3.0％蔗糖+8g/L琼脂,PH=5.8。 所有培养基均采用常规方法灭菌，glyphosate采用过滤灭菌，在培养基冷却至60左右加入。 方法 幼胚培养 在小麦开花授粉后14~18d，以幼胚0.5~1.0mm大小，半透明装为宜。田间去取整穗，剥掉内外颍壳，籽粒在超净台上用75％乙醇表面消毒30s，无菌水冲洗三次， 0.1％的升汞浸泡15min，无菌水冲洗3~5次。然后用解剖刀取出幼胚，盾片向上接种于诱导培养基上。暗培养两周后转入筛选培养基继续暗培养，每两周继代一次，三周后转入分化培养基上进行分化培养，每两周继代一次，三周后转入生根培养基上进行生根培养。 接种采用盾片向上放置，这样有利于产生愈伤组织，致密愈伤组织诱导率要显著高于盾片向下放置[1］。筛选培养草甘膦设置4个不同浓度，一个对照，按照浓度不同做4次重复。 数据统计 愈伤组织诱导率=（产生的愈伤组织数/接种幼胚数）×100％； 芽分化率=（分化出芽的愈伤数/接种愈伤数）×100％； 再生率=（再生出完整植株达的愈伤数/接种愈伤数) ×100％。 结果与分析 不同小麦品种幼胚愈伤组织的诱导 小麦幼胚接种后3d左右开始膨大，在盾片周围逐渐形成愈伤组织，一周基本全部形成愈伤，两周形成较大愈伤组织（图1）。在相同的诱导培养条件下四个不同品种小麦愈伤的诱导率均不相同（表1），且品种间差异显著。 图1 周麦18的幼胚愈伤组织 表1 不同小麦品种幼胚愈伤组织的诱导 品种 接种胚数（个） 愈伤数（个） 愈伤诱导率（％）（个） 郑麦9023 816 489 59.9 郑麦366 861 745 86.5 周麦18 740 706 95.4 矮抗58 1050 927 88.3 2.2 草甘膦对小麦幼胚转化效率的影响 转入筛选培养基以后，愈伤继续膨大。本实验选用了MS基本培养基和不同浓度的草甘膦。经过三周培养，每个品种中在加入不同浓度草甘膦的培养基上表现出明显差异（图3）。结果显示，对于郑麦9023、周麦18来说，采用浓度为2m.mol/L的草甘膦筛选比较适宜；对于郑麦366适宜的筛选浓度为1m.mol/L；而矮抗58适宜的筛选浓度4m.mol/L。小麦幼胚愈伤组织生根很容易，在分化培养基上分化出小苗，转至生根培养基后就逐渐生根，形成完整植株，生根率达100％。因此，对于小麦幼胚愈伤组织芽分化率和再生率相同。本实验中所选的四个品种在相同的分化条件下矮抗58的分化再生能力最强，其余三个品种分化能力相差不大。每个品种的愈伤组织随着草甘膦浓度的增大分化率减小。 图2 草甘膦浓度对小麦愈伤组织分化的影响 表2 筛选剂草甘膦适宜浓度的确定 草甘膦浓度 品种 （m.mol/L） 接种块数（个） 四周褐化数（个） 褐化死亡率（％）