细胞生物学要点分析.pptVIP

细胞工程（cell engineering）:也称细胞技术。指在细胞水平上，采用细胞生物学、发育生物学、遗传学及分子生物学等学科的理论与方法，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得具有产业化价值的细胞相关产品的一门综合技术体系. 广义细胞工程 （二）基本培养系统 传统悬浮培养系统：不锈钢发酵罐（高度：直径=1：1~ 3：1）和搅拌器，产生气泡易引起机械损伤。 旋转细胞培养系统：模拟失重状态，有效降低机械损伤，应用面广。 2. 气流驱动培养系统 主要优势在于简化设计，因为不需要搅拌器中的发动机和搅拌装置。 细胞的基本生长特征： 利用显微注射装置，将一个细胞的核移植入另一个去核细胞中，已得到重组细胞。是克隆的关键技术。 （一）技术路线 1. 细胞质的选择： 受精卵、处于M II期的卵母细胞，可以使植入细胞核的基因组行为发生重编程（regrogramming），从而去分化恢复全能性状态。 4. 重构胚的构建： 直接将供核细胞移植到 M II期卵母细胞/受精卵透明带下，经细胞融合实现重组—已应用于多种家畜。 取供核细胞核直接注入已去核的受体细胞质—多用于克隆小鼠。 体细胞核移植的成功，证明高度分化的成体细胞核仍具发育全能性，能在成熟卵母细胞中实现重编程，发育为完整个体。 M II 期的卵母细胞中含大量MPF，可诱导供体核发生一系列早熟变化，尤其易使S期细胞核出现染色体异常，对G1期染色体损害较小。 选取G0或G1期细胞为核供体，选MPF水平低时的卵母细胞为受体。 （1）脂质体包埋法 脂质体包裹DNA，通过与受体细胞膜融合使DNA片段进入细胞。 （2）磷酸钙共沉淀法 DNA与磷酸钙形成共沉淀颗粒，吸附于细胞表面，通过胞饮作用进入细胞。 （3）DEAE-葡聚糖吸附法 通过病毒感染的方式导入外源基因。 病毒载体为缺陷型病毒，感染后将基因组转入细胞，无法产生包装的病毒颗粒。 常用：腺病毒载体、逆转录病毒载体。 一种B淋巴细胞能接受一种抗原决定簇的刺激，分化繁殖成为可分泌相应抗体的克隆系。大量B淋巴细胞可分泌出识别许多抗原决定簇的抗体。 应用价值： 由于微生物缺乏蛋白质翻译后的加工修饰系统，因此许多复杂人体蛋白必须用真核动物细胞表达。如： 溶血栓药物--组织型纤溶酶原激活剂（tPA） 血友病药物—凝血因子 VIII 促红细胞生成素—治疗肿瘤化疗或肾脏疾病导致的红细胞减少症 基因工程动物 组织工程皮肤 组织工程膀胱 二. 基因工程动物的产生 转基因动物 （transgenic animal） 基因剔除动物 （gene knockout animal） 1、疾病动物模型 目前已有多种遗传疾病的模型小鼠，是研究人类疾病的有利工具。 2、动物生物反应器（bioreactor） 主要用于生产目的蛋白质，如：乳腺生物反应器 3、人类移植用器官 通过遗传改造减少排斥。 三. 基于细胞的组织工程 将体外培养的功能细胞植入患者体内，以代偿病变细胞所丧失的功能。 还可先将体外细胞进行遗传修饰，再用于治疗 四. 细胞治疗 （一）细胞替代 1、神经系统疾病：如帕金森综合症 2、肿瘤：造血干细胞移植 3、其他疾病：烧伤、糖尿病、心脏损伤等。 （二）基于工程学细胞的基因治疗 思考题： 简要叙述单克隆抗体制备流程。 思考题 名词解释： 细胞工程 单克隆抗体 细胞核移植 第十四章 细胞工程 微生物细胞工程 植物细胞工程 动物细胞工程 第一节 主要相关技术 基因操作 细胞的遗传修饰 细胞的表型分析 工程化细胞的应用 1）微载体（microcarrier） 基质材料：交联葡聚糖 1g 交联葡聚糖提供 6000cm2 附着面积 微载体是大规模培养方法中最有使用价值的支持物。 一、 动物细胞大规模培养技术 (一)基本策略 1.增加培养容积 2.增加细胞的附着面积 2）中空纤维（hollow fiber） 管壁半透性，细胞附于管外壁，管内可供培养液通过。 有利于分泌型表达蛋白的纯化，但不易放大培养。 3）微胶囊（microcapsule） 半透性膜囊，细胞长于内壁。微囊颗粒需要自行制备，无商业购买途径。 细胞密度大、产物在单位体积中浓度高、分离纯化简单。 3、抑制细胞的凋亡 在生产特定蛋白质（如疫苗、抗体等）的大规模细胞培养中宜用无血清培养： 避免血清中的蛋白质对目的蛋白纯化的影响。 延长G1期或促使细胞停于G0期，使细胞较长时间维持在高密度状态，利于产生更多目的产物。 降低细胞死亡率，避免死亡细胞的蛋白酶释放至培养基导致目的蛋白降解。 4、无血清培养： 延长G1期，或促使细胞停于G0期，细胞活力正常，可有效抑制凋亡。 1. 悬浮培养系