实验三不规则抗体要点分析.pptVIP

实验三 不规则抗体的筛选与鉴定 什么是不规则抗体? 指ＡＢＯ血型以外的抗体，即抗Ａ和抗Ｂ以外的抗体 . 也包括ABO亚型抗体，如抗A1、A2、A3等 不规则抗体有何临床意义? 引起各类免疫性输血反应 缩短输入RBC的存活时间 新生儿溶血病 不规则抗体筛选方法有那些? 盐水介质法 间接抗球蛋白试验 低离子强度介质聚凝胺法 酶技术 凝胶微柱法 再结吸收、放散等血清学手段，对抗 体的特异性作分析 一、不规则抗体筛选实验 --盐水法.凝聚胺法 【实验原理】 应用特定的筛选细胞（1，2，3号），与被检者血清在两种介质（盐水，低离子介质凝聚胺）中反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。 【标本、试剂与器材】 1. 标本 被检者不抗凝全血； 2. 试剂 符合国家标准的1、2、3号筛选谱细胞、0.9%氯化钠、凝聚胺试剂盒 3. 器材 试管、滴管、记号　　 　　　笔、离心机等. 【操作步骤】 表 一 1 2 3 待捡血清 1滴 1滴 1滴 2～5% 1号筛选谱细胞 1滴 2～5% 2号筛选谱细胞 1滴 2～5% 3号筛选谱细胞 1滴 1. 盐水法 按表一加样后,1000×g离心15s，轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集结果，记录结果. 2. 凝聚胺 按表一加样后,依次加入低离子介质溶液、凝聚胺溶液, 1000×g离心15s，弃上清夜,摇动试管,看是否形成凝集(如没有凝集形成需重做),加悬浮液,观察凝集是否散开,记录结果 【结果判断】 1、2、3号筛选谱细胞管出现±～4+凝集者为抗体筛选阳性结果。 【方法评价与注意事项】 1. 被检者自身血清加自身红细胞管应无凝集；若出现凝集则提示存在自身免疫性抗体； 2. 在盐水、 低离子凝聚胺介质中，1、2、3号筛选谱细胞只要有一个或一个以上管出现±～4+凝集，表示被检者血清中存在不规则抗体，需进一步鉴定抗体特异性； 3. 无凝集，表示被检者血清中不存在不规则抗体。 4.低离子凝聚胺出现凝集，而盐水介质无凝集，则提示不规则抗体为IgG性质。 二、不规则抗体鉴定试验--凝胶微柱法 【实验原理】 对不规则同种抗体筛选试验阳性的被检者应检查其抗体特异性。根据谱细胞（1-10号共10个鉴定细胞）与被检者血清在三种介质（盐水、酶、抗人球蛋白）中反应结果加以判定。 【标本、试剂与器材】 1. 标本 被检者不抗凝全血； 2. 试剂 符合国家标准的1-10号鉴定谱细胞、凝胶微柱卡； 3. 器材 台式离心机、37℃水浴箱、血液细胞洗涤离心机。 谱细胞（Panel Cell） 由8～12个人份的已知血型表现型的O型RBC配套组成 具有各种不同的抗原成分，分布各具特点，与抗体反应出现不同的格局 能检出常见抗体和稀有抗体 每种抗原在谱细胞上保持一定的阴阳比率 为了证实单价抗体，使用的　 　　　　相应抗原RBC应为1　 　　　　个以上 【操作步骤】 1.　向凝胶卡内依次加0.8-1% 1～10号鉴定谱细胞50ul, 2.　每孔加被检者血清25ul, 3.　37℃温15min, 4.　专用离心机离心10min,观察结果． 【方法评价与注意事项】 1. 被检者自身血清加自身红细胞管应无凝集；若出现凝集则提示存在自身免疫性抗体； 2. ±～4+凝集为阳性结果，表示待检血清中有不规则抗体，结合谱红细胞反应格局，确定抗体特异性； 3. 无凝集，表示被检者血清中无不规则抗体。 4. 凝胶微柱出现凝集，而盐水介质无凝集，则提示　　 　　　　不规则抗体为IgG性质。 * * 【结果判断】 *