基因工程原理第12章植物基因工程要点分析.pptVIP

双元载体 Ti质粒的vir基因的功能是以反式方式来实现的 vir基因和包含转化基因的卸甲T-DNA可以由不同的质粒提供——双元载体 * 根瘤农杆菌叶盘转化 * 农杆菌与单子叶植物 大部分单子叶植物在农杆菌的宿主范围之外 受伤的单子叶植物不能产生足够水平的酚类物质来诱导vir基因表达 农杆菌转化水稻是第一个得到转化的谷类植物 单子叶植物的受伤位点倾向于木质化 添加酚类物质，增强毒性功能 * 高容量双元载体 非常大的基因分析或者多基因的转化 BIBAC2，包含一个F质粒的复制起始位点，并且模仿细菌人工染色体 反式提供高水平的VirG和VirE的毒性辅助质粒 TAC，模仿P1人工染色体的载体 用于由突变确定的基因的定位克隆 * 根毛农杆菌与Ri质粒 毛根农杆菌引起植物毛状根疾病，它是由根诱导质粒（Ri）引发的 Ri质粒是类似于根瘤农杆菌的Ti质粒 Ri T-DNA在植物中通过有性方式传递，并影响多种形态学和生理学性状，但通常可能不具有毒性 * DNA直接转化植物 原生质体转化 扩大农杆菌的宿主范围 聚乙二醇、电转化 原生质体转化的主要限制不在于基因转化过程本身，而是在于宿主物种从原生质体再生的能力 * 基因枪 使用金属颗粒包裹DNA，以足够穿透细胞壁的速度打入植物细胞。 TMV轰击洋葱表皮 大豆、烟草、玉米 应用范围没有限制，完全由物理参数控制 * 整株（in planta）转化 减少对组织培养的需求 拟南芥 个体小，每株产生的种子多 种子在农杆菌的培养物中浸泡吸取过夜，然后再进行发芽 将细菌真空渗透进拟南芥的花中 将受精时期的花浸泡在细菌悬液中 * 叶绿体转化 T-DNA复合物往往都要进入细胞核 衣藻，单个的大型叶绿体 颗粒轰击 基因枪和聚乙二醇转化实现有效的叶绿体转化 * 植物病毒载体 农杆菌或DNA直接转移的替代，具有以下优点： 病毒可以吸附完整的植物细胞并将其核酸导入 感染细胞可以产生大量病毒，可以进行高水平的基因表达 病毒感染通常是全系统的 病毒感染很快，几周之内就会产生大量的重组蛋白 植物病毒是游离型复制，不受位置效应的影响 * DNA病毒载体 花椰菜花叶病毒 典型成员是CaMV 最大插入片段小于1kb * 双粒病毒 具有一对病毒粒子，它们含有两个可以部分融合的20面体衣壳 开发成表达载体 适于在全植株进行表达的载体 * RNA病毒载体 烟草花叶病毒 TMV 研究最为广泛的一类植物病毒 重组病毒不能蔓延到整个植株 不存在包装限制 * 马铃薯病毒X (PVX) 6.5kb 的单链RNA基因组，并包装在丝状粒子中 PVX一般不用于长期表达，而是广泛用作瞬时表达载体 * 发生杂种不育是因为P系含有转座基因元件——P元件，它可以在M系雌蝇的卵细胞中转移。P元件在P系内部的交配中不会造成不育，因为P元件在P细胞型的卵细胞中不能转移。这是因为P元件编码一个自身转座酶的抑制子，会抑制转座。当一个P细胞型雄性的精子使M细胞型的卵细胞受精时，卵细胞中抑制子的缺乏将使转座酶暂时失去抑制，从而导致发生高频率的P元件转座。不育综合症高频率的突变特性反应了P元件插入了多个基因位点。 * 这些实验表明P元件可以从注射进入的质粒高效转座到生殖细胞染色体的不同位点上。在每个后代生殖系中整合的P元件至少有一个存有功能，这可以从随后其与M细胞型卵细胞进行交配会出现的高突变率这一结果中得到证明。 * 上图是一个简单的P元件载体，它由在细菌载体pUC8中克隆的P元件组成。P元件的大部分已为rosy基因所替代，但是对转座所必需的末端重复则保留了下来。载体上包括一个多克隆位点以方便插入外源序列。 通过共注射一个辅助P元件，反式提供转座酶来实现重组。 * 在20世纪80年代早期，人们首次成功实现了将外源基因导入植物进行表达。此后的20年里，我们目睹了植物基因工程的一场革命，一百多种不同的植物种的转化现在只需按一种常规的程序就可进行。我们深入研究了以土壤中的根瘤农杆菌为基础构建的载体系统，以及与直接DNA转移有关的几种不同的策略，从而可以熟练的操作植物基因组。另外，人们将植物病毒发展成为通用的附加型载体，用来高水平的瞬时表达基因。 * * Need to work on this one to complete the cycle 植物和动物的一个基本的差别，在于有组织的且分化的植物组织表现出很高程度的发育可塑性。 在植物体的创伤部分，愈伤组织可帮助伤口愈合；在嫁接中，可促使砧木与接穗愈合，并由新生的维管组织使砧木和接穗沟通；在扦插中，从伤口愈伤组织可分化出不定根或不定芽，进而形成完整植株。在植物器官、组织、细胞离体培养时，条件适宜也可以长出愈伤组织。其发生过程是：外植体中的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞分化为薄壁组织