第14章(十三)细胞凋亡与衰老要点分析.pptVIP

第十三章 细胞凋亡与衰老 第一节 细胞凋亡(Apoptosis) ●细胞凋亡的概念及其生物学意义 ●细胞凋亡的形态学和生物化学特征 ●细胞凋亡的分子调控机理 一、细胞凋亡的概念及其生物学意义 ●概念：细胞凋亡是一个主动的由基因决定的自动结束生命的过程，由于细胞凋亡受到严格的遗传机制决定的程序性控制，所以也常常被称为细胞编程死亡（programmed cell death, PCD）。 ●生物学意义：细胞凋亡对于多细胞生物个体发育的 正常进行，自稳平衡的保持以及抵御外界各种因素 的干扰方面都起着非常关键的作用。 细胞凋亡的失调可导致多种疾病： 凋亡不足会导致包括肿瘤在内的多种疾病； 凋亡过度会导致机体免疫功能的丧失或免疫低下。 　　　　 (1)维持内环境的稳定. 通过细胞凋亡可以清除机体不再需要的细胞而不引起炎症反应。 (2)确保正常的生长发育 蝌蚪尾的消失，骨髓和肠的细胞凋亡 　 脊椎动物的神经系统的发育， 　 发育过程中手和足的成形过程。 (3)积极参与机体防御 如:病毒感染细胞后,细胞通过DNA片段化阻止病毒 DNA复制。 二、细胞凋亡的形态学和生物化学特征 ●细胞凋亡的形态学特征 ●细胞凋亡的生化特征 ●诱导细胞凋亡的因子 ●细胞凋亡的检测 ●细胞凋亡与坏死(necrosis) 1.细胞凋亡的形态学特征 ◆凋亡的起始：细胞表面的特化结构如微绒毛消失，细胞间接触的消失，但细胞膜依然完整；线粒体大体完整，但核糖体逐渐从内质网上脱离，内质网囊腔膨胀，并逐渐与质膜融合；染色质固缩，形成新月形帽状结构等形态，沿着核膜分布。 ◆凋亡小体的形成：核染色质断裂为大小不等的片段，与某些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞质膜所包围。细胞表面产生了许多泡状或芽状突起，逐渐形成单个的凋亡小体 ◆凋亡小体逐渐为邻近的细胞吞噬并消化 2.细胞凋亡的生化特征 ◆细胞凋亡的主要特征是形成大小为 180～200bp特征性的DNA ladders ◆凋亡细胞组织转谷氨酰胺酶tTG （tissue Transglutaminase）积累并达 到较高水平 3.诱导细胞凋亡的因子 ◆物理性因子，包括射线（紫外线，? 射线等）， 较温和的温度刺激（如热激，冷激）等 ◆化学及生物因子：包括活性氧基团和分子，DNA 和蛋白质合成的抑制剂，激素，细胞生长因子，肿 瘤坏死因子?（TNF?），抗Fas/Apo-1/CD95抗体等 4.细胞凋亡的检测 ◆形态学观测： 染色法：台盼兰: 使死细胞染色 中性红:活细胞染色 DAPI: 可观察到细胞核的形态变化 Giemsa:可观察到染色质固缩、趋边，凋亡小体的形成 透射和扫描电镜观察 ◆DNA电泳：DNA片段就呈现出梯状条带 ◆TUNEL测定法：指末端脱氧核苷酸移换酶介导的dUTP缺口末端标记测定法。通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP （多为dUTP）间接或直接接到DNA片段的3’-OH端，再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。 ◆彗星电泳法（comet assay） 将单个细胞悬浮于琼脂糖凝胶中，经裂解处理后，再在电场中进行短时间的电泳，并用荧光染料染色，凋亡细胞中形成的DNA降解片段．在电场中泳动速度较快，使细胞核呈现出一种彗星式的图案；而正常的无DNA断裂的核在泳动时保持圆球形，这是一种快速简便的凋亡检测法。 ◆流式细胞分析 根据凋亡细胞DNA断裂和丢失，采用碘化丙啶使DNA 产生激发荧光，用流式细胞仪检出凋亡的亚二倍体细胞，同时又能观察细胞的周期状态。 5.细胞凋亡与坏死(necrosis) ●二者的主要区别是：细胞凋亡过程中，细胞质膜反折，包裹断裂的染色质片段或细胞器，然后逐渐分离，形成众多的凋亡小体（apoptotic bodies），凋亡小体则为邻近的细胞所吞噬。整个过程中，细胞质膜的整合性保持良好，死亡细胞的内容物不会逸散到胞外环境中去，因而不引发炎症反应。 相反，在细胞坏死时，细胞质膜发生渗漏。细胞内容物，包括膨大和破碎的细胞器以及染色质片段，释放到胞外，导致炎症反应。可能是细胞程序性死亡的另一种形式。 ● 细胞自噬：是与细胞凋亡不同的另一种 程序性死亡